[发明专利]一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测的方法

权利要求书

1、一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测的方法，其特征在于通过以下步骤实现：

1)通过计算机软件分析丙型肝炎病毒不同亚型的核心抗原序列，确定2个高度保守、抗原性强的氨基酸序列：QDVKFPGGGQIVGGVY、PRGSRPSWGPTDPRRR；

2)利用单克隆抗体技术制备2株高效分泌特异性抗HCV核心抗原的鼠源杂交瘤细胞株，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号分别为CCTCCNO：C200823、CCTCC NO：C200824，进行抗体纯化得到高比活的抗HCV核心抗体；

3)将冻干的辣根过氧化物酶纯化后，与制备的单抗混合形成酶结合物；

4)重构HCV核心抗原和其它非结构蛋白的嵌合抗原；

5)将以上制备的抗HCV cAg的单克隆抗体和嵌合抗原同时包被酶联板，加入待测样品进行检测。

2、根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测的方法，其特征在于，所述的嵌合抗原通过以下方式制备：根据HCV全基因序列设计合成8条引物，用PCR分片段克隆NS-3，NS-4、NS-5和Core核心的相应基因片段，构建重组载体并转化大肠杆菌诱导表达蛋白，表达产物用亲和层析进行纯化再采用Western blot法鉴定活性。

3、根据权利要求2所述的一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测的方法，其特征在于，所述8条引物分别为：

1)HCV-core-F：TTG CTC GAG AGG CGA CAA CCT ATC C；

2)HCV-core-R：GGC GGA GAC GGG CAG TCG GGG TGA CAG GAG；

3)HCV-NS3-F：CTC CTG TCA CCC CGA CTG CCC GTC TCC GCC；

4)HCV-NS3-R：GCT ATC AGC CGG TTC ATG TCT ACA TTG GTG TAC；

5)HCV-NS4-F：GTA CAC CAA TGT AGA CAT GAA CCG GCT GAT AGC；

6)HCV-NS4-R：GGA GTA CGA CTC AAC CTG GGT AAC ACG CGC；

7)HCV-NS5-F：GCG CGT GTT ACC CAG GTT GAG TCG TAC TCC；

8)HCV-NS5-R：CAC TCG GGC ACA GGG AAG TTT GGC CTT GAC。