[发明专利]蛭弧菌微生态制剂的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物制剂的制备方法，具体地说，本发明是一 种蛭弧菌微生态制剂的生产方法。

背景技术

蛭弧菌是一类专门捕食大肠杆菌、沙门杆菌、副溶血弧菌等致病 菌为主的寄生性细菌。蛭弧菌作为有效的生物防治病害的生物制剂， 很受到动物病害防治及环境改善行业人士青睐。目前，蛭弧菌生产培 养采用活宿主菌培养法，一方面宿主菌获取困难不利于大规模生产， 另一方面活宿主菌本身会破坏环境不利于蛭弧菌微生态制剂大规模 使用。因而，现有技术存在不利于大规模工业生产及蛭弧菌微生态制 剂安全使用缺点，本工艺通过巧妙的设计使上述问题得到很好的解 决，同时所生产制备的蛭弧菌具有批次间菌数稳定、临床使用效果好 之特点。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛭弧菌微生态制剂的生产方法。本工艺 提供了有效宿主菌发酵制备方式，采用冷冻干燥技术确保宿主菌的保 存质量，为蛭弧菌大规模生产提供可能；采用100～105℃宿主菌灭 活技术保存形态完整宿主菌菌体为蛭弧菌寄生增殖创造条件，同时有 效解决了活宿主菌给环境造成的污染，为蛭弧菌微生态制剂大规模使 用提供可能。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

本发明通过以下技术方案获得：

该生产方法包含以下步骤：A.制备冻干宿主菌粉；B.制备蛭弧 菌培养基；C.以2～5％的蛭弧菌种子接种于装有蛭弧菌培养基的发 酵罐中，30～33℃通气培养20～24小时，即得蛭弧菌微生态制剂。

所述的宿主菌是大肠杆菌。

在蛭弧菌种子中，蛭弧菌种子的蛭弧菌菌数为1.0×10⁷cfu/ml。

所述的蛭弧菌培养基由以下成分组成：0.004wt％～0.006wt％的 冻干宿主菌粉，20mg/L～50mg/L的氯化钙，20mg/L～50mg/L的氯 化镁，加入磷酸缓冲液使培养基的pH值保持在7.0～7.8。

所述的蛭弧菌培养基各成分在混合均匀后，在100～105℃灭菌 10～15min。

本发明具体可以采用以下步骤：

1、宿主菌大肠杆菌的培养制备：

以2～3％接种量接种宿主菌种子液(菌数大于1.0×10⁸cfu/ml) 于含有2～3％蛋白胨、0.6～1.0％酵母粉、0.8～1.0％氯化钠灭菌后的 培养基的发酵罐中，通过发酵罐转数及通气量使发酵液中溶氧维持在 70～90％水平，通过盐酸及氢氧化钠溶液使发酵罐内pH保持在7.0～ 7.8之间，经20～24小时发酵得到宿主菌发酵液；离心发酵液获取宿 主菌泥，灭菌自来水清洗3次得宿主菌泥，于冷冻干燥机器中-20～ -15℃条件下冷冻干燥得到冻干宿主菌粉，保存备用。

2、蛭弧菌微生态制剂的制备：

蛭弧菌培养基成分：0.004％～0.006％的冷冻干燥宿主菌粉， 20mg/L～50mg/L氯化钙，20mg/L～50mg/L氯化镁，通过加入磷酸 缓冲液使培养基pH保持在7.0～7.8，100～105℃灭菌10～15min。

以2～5％的蛭弧菌种子(蛭弧菌菌数1.0×10⁷cfu/ml)接种于装 有上述培养基发酵罐中，30～33℃通气培养20～24小时，蛭弧菌数 可达1.0×10⁹cfu/ml以上，即为蛭弧菌微生态制剂。

除非另有说明，本发明所述的百分比均为重量比。

本发明具有如下的优点：

1、蛭弧菌微生态制剂宿主菌生产工艺独特，采用了冷冻干燥工 艺确保宿主菌保存质量，为蛭弧菌生长繁殖提供了稳定可靠的增殖营 养源。

2、本工艺采用100～105℃进行灭活有害宿主菌，可有效保持宿 主菌的完整形态利于蛭弧菌的生长繁殖。

3、本发明蛭弧菌发酵罐中生产时间为24小时，具有生产周期短 节约能源的特点。

4、本工艺采用了冷冻干燥工艺制备保存保存宿主菌，确保蛭弧 菌保存质量又可保持蛭弧菌批次生产间菌数稳定。