[发明专利]一种乳中α－酪蛋白含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法，尤其是一种利用毛细管电 泳检测乳中α-酪蛋白含量的方法，特别是关于毛细管电泳检测乳中α-酪蛋白含 量过程中样品的处理步骤的改进。

背景技术

酪蛋白制品是乳品工业的主要产品之一，由于其具有优良的功能特性和较 高的营养价值，因此在食品工业和其他工业上都得到了广泛的应用。酪蛋白具 有较高的营养价值，可添加到其他食品中强化蛋白质。酪蛋白能够在水中形成 胶体，具有一定的粘度和良好的持水特性，在冰淇淋生产中。添加酪蛋白酸钠 做稳定剂，具有增强脂肪乳化、保湿和改善粘度等作用。酪蛋白中存在着明显 的疏水区和亲水区，因此具有较好的乳化性和发泡性。近年来，对酪蛋白生理 功能及生物活性的研究日益增多，对酪蛋白采用各种方法改性制备改性产品也 越来越受到关注，因此酪蛋白改性制品的生产必将成为今后食品工业发展的一 大趋势。因此准确检测出乳中α-酪蛋白含量对于乳品加工过程中各种功能及营 养的配比具有非常重要的意义。

α-酪蛋白大约占牛乳总酪蛋白含量的45-55％，是酪蛋白胶粒结构中的基 本组成部分，主要有αs1-酪蛋白和αs2-酪蛋白两种形态。α-酪蛋白由199个氨 基酸组成，每个分子上结合8个磷酸根离子，结合位点主要集中在肽链的第 43—79位置处，在这个部位经酶解可得到磷肽。

目前，国内尚未有α-酪蛋白含量检测方法的国家标准和行业标准。相关国 标有DIN-10466—2001《牛奶和牛奶制品的全部蛋白中乳清蛋白含量的测定》、 DIN-10470-1999《牛奶和牛奶制品的全部蛋白质中乳蛋白含量和酪蛋白含量测 定》、DIN—10472—1996《牛奶和乳制品总蛋白量中乳蛋白和酪蛋白成分量测 定-电泳法》。

毛细管电泳仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离技术。它 能快速精确检测出牛奶中的掺假成分、抗生素、添加的功能性因子、乳清蛋白、 免疫球蛋白、酶、糖、添加剂和其他小分子的含量。毛细管电泳仪检测最低浓 度能达到10.5-10.8mol/L。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为1-2h 左右。目前，毛细管电泳仪的应用前景非常广泛。

《毛细管电泳在牛乳中酪蛋白含量测定及掺假检测方面的应用》(《食品与 发酵工业》，2005年第31卷第1期，张东送、庞广昌、高法国、张涛、陈庆森、 胡志和)公开了一种毛细管电泳法分离和检测原料乳中酪蛋白的方法，该方法 离心处理原料乳来分离脂肪，但离心30min的时间较长，容易引起部分蛋白沉 淀或者脂肪残留。此外，该方法还公开了一种样品缓冲溶液，然而其对酪蛋白 的分离效果仍不够理想。

《奶制品中蛋白质测定的毛细管电泳法研究》，(《分析科学学报》，2006 年2月，第22卷第1期，唐萍、田晶、佘振宝、翁前锋、许国旺)也公开了一 种使用毛细管电泳法检测奶制品中酪蛋白的定量分析方法。

上述两种方法均使用了较长的涂层毛细管柱，但较长的毛细管柱分离时间 也较长，涂层毛细管柱的价格相对较高、容易损坏、对使用环境要求苛刻。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用毛细管电泳检测乳中α-酪蛋白 含量的方法，以提高α-酪蛋白的分离效果，缩短检测时间，降低检测成本。

本发明要解决的另一个技术问题是提供一种乳中α-酪蛋白含量的检测方 法，以提供一种改进的样品处理步骤。

本发明要解决的另一个技术问题是通过采用较短的未涂层毛细管柱，降低 检测成本，提高检测速度。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法， 该方法包括以下步骤：将需要检测的乳样品与样品缓冲液进行混合处理，将混 合处理之后的样品通过毛细管电泳仪进行检测，所述样品缓冲液的配制方法 是：三甲基氨基甲烷缓冲液加3-吗啉代丙烷磺酸、乙二胺四乙酸二钠、尿素， 处理样品时再添加β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素。

优选的，样品缓冲液的配制方法为：160mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液加 40mmol/L3-吗啉代丙烷磺酸、60mmol/L乙二胺四乙酸二钠、7mol/L尿素，处 理样品时再添加5ul/ml的β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.05％，调节pH值 至8.5。