[发明专利]花生β-酮脂酰-ACP合成酶Ⅱ基因及其编码蛋白质

权利要求书

1.一种花生β-酮脂酰-ACP合成酶II基因，其特征在于，它具有SEQ IDNO：1的序列。

2.一种实现权利要求1的花生β-酮脂酰-ACP合成酶II基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.设计引物：根据NCBI数据库中的序列信息设计目的基因的简并引物Kas-5A(5′-ATGGGTTCTGCTATGCTTGC-3′)和Kas-3A(5′-ACCACCAAACCCGAATGAAT-3′)；

B.花生总RNA的获得：以SPI056花生种子作为实验材料，采用Pbiozol植物组织RNA提取试剂盒提取花生种子中的总RNA，RNA含量及质量采用琼脂糖凝胶电泳检测；

C.目的基因cDNA片段的获取：以获得的总RNA为模板，采用SMARTTMRACE Amplification Kit(Clontech)，反转录合成5’-和3’-RACE-Ready cDNA，以5’-RACE-Ready cDNA为模板，进行目的基因片段的PCR扩增。反应程序如下：94℃预变性3min，94℃变性45s，53℃复性50s，72℃延伸60s，30个循环后，72℃延伸10min；

D.目的基因片段的克隆及测序：PCR产物回收后与pMD18-T simple vector连接，连接产物转化E.coli Top 10感受态细胞，采用蓝白斑法筛选阳性克隆，筛选的阳性克隆经PCR进一步验证后测序。根据测得的基因基因片段序列设计5’和3’端cDNA片段引物，分别为GSP1(5′-GCAAAACTCCAGCCCCTTCACCCAT-3′)和GSP2(5′-ATGGGTGAAGGGGCTGGAGTTTTGC-3′)，利用SMARTTM RACEAmplification Kit(Clontech)扩增目的基因5’和3’端基因片段。获得的PCR产物按前述进行操作并测序；

E.目的基因全序列的获得：将测得目的基因片段序列及5’和3’端序列进行拼接后得到目的全长基因序列，根据拼接得到的全长基因序列设计全长基因的扩增引物Rkas-5(5′-TGGCTTTCTCTTCTGCCTTTGC-3′)和Rkas-3(5′-CAATCTATGGTCTTCTCCTGG-3′)；扩增反应如下：94℃预变性3min，94℃变性45s，55℃复性60s，72℃延伸2min，30个循环后，72℃10min，按上述D进行操作并测序，得到目的全长基因及序列。

3.一种编码权利要求1的花生β-酮脂酰-ACP合成酶II，其特征在于，它具有SEQ ID NO：2的序列。

4.一种编码权利要求1的花生β-酮脂酰-ACP合成酶II，其特征在于，它含一个Kas II活性位点，分子量为43181.4，等电点为5.69，为非分泌蛋白，呈紧密的球状结构。

5.如权利要求3所述的β-酮脂酰-ACP合成酶II，其特征在于，其编码序列由DNAssist软件分析所得。

6.如权利要求4所述的β-酮脂酰-ACP合成酶II，其特征在于，其Kas II活性位点为根据PROSITE数据库分析所得，分子量和等电点由Protparam预测所得，非分泌蛋白和呈紧密的球状结构特点分别由软件SignalP 3.0 Server和TMHMM2 program预测而得。