[发明专利]阴离子聚合物接枝涂层毛细管及用于蛋白质在线富集分析方法

权利要求书

1.阴离子聚合物接枝涂层毛细管的制备方法，包括：毛细管预处理、乙烯 基化毛细管内壁、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯接枝反应以及磺酸基修饰反应，其特 征在于：磺酸基修饰反应是向制得的聚甲基丙烯酸缩水甘油酯接枝修饰的毛细管 中通入含0.1-0.3g/l亚硫酸钠及2-6％v/v异丙醇的水溶液，毛细管两端封口 后室温反应1-3天，随后毛细管分别用水、甲醇洗，最后氮气吹干备用，便制 得了阴离子聚合物接枝涂层的毛细管。

2.利用权利要求1制备的阴离子聚合物接枝涂层毛细管进行的蛋白质在线 富集分析方法，其特征在于：

第一步为大体积压力进样，进样条件为：20psi，3min；样品溶液在压力的 驱动下进入毛细管，进样过程中带有正电荷的蛋白质分子会吸附到阴离子聚合物 接枝涂层的毛细管内壁上；

第二步为反向电渗流洗脱富集蛋白质，反向电渗流富集电压为20kV，即将 上步中吸附在管壁的蛋白质分子用pH大于蛋白质等电点的缓冲液将其反向洗脱 下来，蛋白质样品会在样品溶液和洗脱缓冲液的界面处富集；当 毛细管内电流的绝对值为32.5μA时停止加压；

第三步为毛细管电泳法分离分析第二步中富集的蛋白质，运行缓冲液为pH 9.2的20mM磷酸缓冲液。

3.按照权利要求2所述的分析方法，其特征在于所述的样品溶液为蛋白质 溶于pH值小于蛋白质等电点的pH 4.2，5mM磷酸缓冲液。

4.按照权利要求2所述的分析方法，其特征在于所述的洗脱缓冲液为pH 值大于蛋白质等电点的pH 9.2的20mM磷酸缓冲液。

5.按照权利要求2所述的分析方法，其特征在于所述的毛细管温度：25℃， 检测波长200nm。