[发明专利]一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法

权利要求书

1.一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：检测方法的步骤是：

(1).将经过活化培养的敏感指示菌制成浓度为10⁵-10⁹cfu/mL菌悬液；

(2).将菌悬液接种到无菌的敏感菌液体培养基中，制成浓度为10⁴-10⁸cfu/mL敏感菌指示液；

(3).利用多道移液器，向微孔板各孔中加入100-750μL敏感菌指示液，培养0-12h后，通过多道移液器继续加入5-50μL待测的抑菌物质，并反复抽吸使之与敏感菌指示液充分混合；

(4).培养4-24h后，用酶标仪在550nm～660nm下检测各孔中培养液的OD值，并计算出各孔中样品的抑菌率。

2.根据权利要求所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：所述敏感指示菌是原核生物，或真核生物。

3.根据权利要求1或2所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：所述敏感指示菌的原核生物是大肠杆菌(Escherchiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aruginosa)或结核杆菌(Corynebacterium tuberclousis)，所述敏感指示菌的真核生物是酵母菌(Saccharomyces)或念珠菌(Monilia)。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：所述微孔板各孔的容量为300-1000μL，微孔形状为方形或圆形，孔底形状为平底或圆底，为96孔板，或者是48孔板、24孔板。

5.根据权利要求1所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：敏感指示液加入到微孔板后的培养方式和其与待测样品在各孔中充分混合后的培养方式可以是静置培养，或者振荡培养。

6.根据权利要求1所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：所述抑菌物质是从环境中分离得到的天然菌株包括原核生物、真核生物产生，或基因工程菌通过发酵产生；或从天然产物中直接提取。

7.根据权利要求5所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：所述产生抑菌物质的原核生物是细菌(bacteria)、放线菌(Streptomyces)、粘细菌(Myxobacteria)或假单胞菌(Pseudomonas)，所述产生抑菌物质的真核生物的是霉菌(mould)、念珠菌(Monilia)或酵母菌(Saccharomyces)，所述的天然抑菌物质为天然产物中提取，例如黄酮类物质，壳聚糖类物质。

8.根据权利要求1所述的一种快速检测抑菌物质活性的微孔板生物检测方法，其特征在于：所述抑菌率的计算公式如下：

式中：OD_B：空白对照孔的吸光值，微孔内装有无菌的敏感菌液体培养基；OD_R：菌液对照孔的吸光值，微孔内装有无菌的加入一定敏感指示菌的敏感菌液体培养基；OD：样品测定孔的吸光值。