[发明专利]养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗及制备方法

权利要求书

1.一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗，其特征是用下述方法制成：

(1)制备迟缓爱德华氏菌灭活菌苗：将迟缓爱德华氏菌菌株活化，接种在固体培养基或液体培养基中，32℃～37℃培养24h～48h，当所述迟缓爱德华氏菌生长至平台期时收获，灭活，进行检验，检验合格后即制成迟缓爱德华氏菌灭活菌苗，所述固体培养基为2216E培养基或将15～25gNaCl添加到1升普通营养琼脂培养基中制成的培养基，所述液体培养基是将15～25gNaCl添加到1升营养肉汤培养基中制成的培养基；

(2)制备溶藻弧菌灭活菌苗：将溶藻弧菌菌株活化，接种在固体培养基或液体培养基中，28℃～35℃培养24h～48h，当所述溶藻弧菌生长至平台期时收获，灭活，进行检验，检验合格后即制成溶藻弧菌灭活菌苗，所述固体培养基为2216E培养基或将15～25gNaCl添加到1升普通营养琼脂培养基中制成的培养基，所述液体培养基是将15～25gNaCl添加到1升营养肉汤培养基中制成的培养基；

(3)用质量体积百分比浓度为0.85％的生理盐水或pH＝7.2、0.1M的无菌磷酸盐缓冲液分别将所述迟缓爱德华氏菌灭活菌苗和所述溶藻弧菌灭活菌苗调整浓度为10⁸CFU/mL～10¹²CFU/mL，再按迟缓爱德华氏菌:溶藻弧菌数量比为1:0.1～3的比例混合均匀，即制成一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗。

2.根据权利要求1所述的一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗，其特征是所述灭活为热灭活或化学方法灭活。

3.根据权利要求2所述的一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗，其特征是所述热灭活的温度为60℃～70℃，灭活时间为24h～30h。

4.根据权利要求2所述的一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗，其特征是所述化学方法灭活所用灭活剂为甲醛或苯酚，所述加入甲醛后的终体积百分比浓度为0.1％～1.0％，所述加入苯酚后的终质量体积百分比浓度为1.0％～2.0％，温度为20℃～35℃，时间为48h～96h。

5.一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗的制备方法，其特征是由下述步骤组成：

(1)制备迟缓爱德华氏菌灭活菌苗：将迟缓爱德华氏菌菌株活化，接种在固体培养基或液体培养基中，32℃～37℃培养24h～48h，当所述迟缓爱德华氏菌生长至平台期时收获，灭活，进行检验，检验合格后即制成迟缓爱德华氏菌灭活菌苗，所述固体培养基为2216E培养基或将15～25gNaCl添加到1升普通营养琼脂培养基中制成的培养基，所述液体培养基是将15～25gNaCl添加到1升营养肉汤培养基中制成的培养基；

(2)制备溶藻弧菌灭活菌苗：将溶藻弧菌菌株活化，接种在固体培养基或液体培养基中，28℃～35℃培养24h～48h，当所述溶藻弧菌生长至平台期时收获，灭活，进行检验，检验合格后即制成溶藻弧菌灭活菌苗，所述固体培养基为2216E培养基或将15～25gNaCl添加到1升普通营养琼脂培养基中制成的培养基，所述液体培养基是将15～25gNaCl添加到1升营养肉汤培养基中制成的培养基；

(3)用质量体积百分比浓度为0.85％的生理盐水或pH＝7.2、0.1M的无菌磷酸盐缓冲液分别将所述迟缓爱德华氏菌灭活菌苗和所述溶藻弧菌灭活菌苗调整浓度为10⁸CFU/mL～10¹²CFU/mL，再按迟缓爱德华氏菌:溶藻弧菌数量比为1:0.1～3的比例混合均匀，即制成一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗。

6.根据权利要求5所述的一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗的制备方法，其特征是所述灭活为热灭活或化学方法灭活。

7.根据权利要求6所述的一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗的制备方法，其特征是所述热灭活的温度为60℃～70℃，灭活时间为24h～30h。

8.根据权利要求6所述的一种养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗的制备方法，其特征是所述化学方法灭活所用灭活剂为甲醛或苯酚，所述加入甲醛后的终体积百分比浓度为0.1％～1.0％，所述加入苯酚后的终质量体积百分比浓度为1.0％～2.0％，温度为20℃～35℃，时间为48h～96h。