[发明专利]一种抗农药速灭威的特异性抗体

权利要求书

1.农药速灭威的人工抗原和抗体其特征在于使用分子式为

的1-(3-羧乙基)-3-间甲苯基脲作为半抗原与血蓝蛋白连接合成人工抗原，与辣根过氧化物酶连接合成酶标抗原，其中人工抗原再经过免疫新西兰大白兔，取血，分离出抗血清纯化制得抗体。

2.权利要求1所述的农药速灭威人工抗原的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：

(1)半抗原1-(3-羧乙基)-3-间甲苯基脲的合成

称取445-460mg β-氨基丙酸和665-675mg 1-间甲苯异氰酸酯置于100mL圆底烧瓶中，加入50mL无水四氢呋喃溶液，室温搅拌反应过夜，过滤，所得滤液过硅胶柱，用比例为1∶40的甲醇∶二氯甲进行洗脱1小时，然后将洗脱液换为纯甲醇，冲洗柱子0.5小时，收集全部洗脱液，真空干燥即得速灭威半抗原1-(3-羧乙基)-3-间甲苯基脲；

(2)半抗原1-(3-羧乙基)-3-间甲苯基脲活化酯的合成

取上述方法合成的半抗原1-(3-羧乙基)-3-间甲苯基脲110-120mg，71-73mg的N-羟基琥珀酰亚胺置于25ml圆底烧瓶并加入3ml无水四氢呋喃，在氮气保护下逐滴加入4ml溶有120mg N，N-二环己基碳二亚胺的无水四氢呋喃溶液，边滴边搅拌，室温下搅拌反应4小时，将反应体系置于-20℃冰箱内18小时，过滤除去白色沉淀，旋蒸除去有机溶剂，再以少许乙酸乙酯溶解，-20℃结晶，即可得到白色针状半抗原活化酯；

(3)人工抗原的合成

取上述方法合成的半抗原活化酯2.16mg溶于2ml二甲基甲酰胺配成溶液A，1.26mg血蓝蛋白溶于2ml pH 7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液中配成溶液B，然后在冰浴下将溶液A缓慢的加入溶液B中，经搅拌后在4℃下反应过夜，最后将反应液置入透析袋中，在4℃下用pH 7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液透析三天即可得到人工抗原。

3.权利要求1所述的农药速灭威酶标抗原的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：

取权利要求2中所合成的半抗原活化酯1.19mg溶于2ml二甲基甲酰胺配成溶液A，0.51mg辣根过氧化物酶溶于2ml pH 7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液配成溶液B，然后在冰浴下将溶液A缓慢的加入溶液B中，经搅拌后在4℃下反应过夜，最后将反应液置入透析袋中，在4℃下用pH7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液透析三天即可得到酶标抗原，用于显色反应。

4.权利要求1所述的农药速灭威抗体的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：

免疫动物选用雌性新西兰大白兔，免疫方法采用皮下和肌肉注射法，初免后进行四次加强免疫，加强免疫分别于初次免疫后2周、4周和6周后免疫三次，此后间隔一个月进行第五次免疫，免疫后9天由兔子的耳缘静脉取血，进行效价检测，具体做法是：

初次免疫：取1mg按照权利要求2所述方法合成的人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏完全佐剂等体积所配制的溶液中，进行动物免疫；

加强免疫：用0.5mg上述人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏不完全佐剂等体积所配制的溶液，进行动物免疫；

抗体纯化：定时监测动物抗体效价，当抗体对一定的包被抗原达到适宜效价时，采集血液，并离心获得抗血清，使用G-Sepharose蛋白亲和层析柱对抗血清进行纯化，获得抗农药速灭威的特异性抗体。