[发明专利]一种抗农药速灭威的特异性抗体

说明书

技术领域

本发明属于农药小分子化合物(分子量小于1000道尔顿)免疫化学和农药残留分析技术领域：涉及有机合成，免疫化学，生物化学等学科知识，特别涉及具有β-丙氨酸结构的氨基甲酸酯类农药速灭威人工半抗原、特异性抗原的设计合成和特异性抗体的制备。

背景技术

20世纪70年代以来，由于有机氯农药品种相继被不同国家禁用或者限制使用，以及抗有机磷农药的昆虫品种的日益增多，氨基甲酸酯类农药的使用量逐年增加。随着生活水平和健康意识的提高，人们越来越重视农药残留问题，对氨基甲酸酯类农药残留的测定也给予了越来越多的关注。

速灭威属于氨基甲酸酯类农药，是农作物保护中广泛使用的农药，主要用于防治水稻、棉花、茶树、柑橘等农作物的害虫。该农药纯品为白色晶体，难溶于水，易溶于甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙睛等有机溶剂，在碱性和高温条件下容易分解，并且具有分解快、残留期短、低毒、高效、选择性强等特点。虽然研究表明速灭威的毒性小于同类农药西维因、克百威等，但毕竟存在一定毒性，在食物中残留可能对人造成危害，因而迫切需要开发对速灭威残留检测技术。

目前对于速灭威农药检测的方法主要是色谱法，但这些方法都存在检测时间长，前处理复杂，消耗大量溶剂，需昂贵仪器等缺点，并且不能进行现场在线检测或跟踪监测。因此，迫切需要一种简便，快速，灵敏的检测方法。

酶联免疫吸附分析即ELISA法，利用了抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用，即保持了酶催化反应的敏感性，又保持了抗原抗体的特异性，因而极大的提高了灵敏度。同时它又是一种非均相免疫分析，即在反应中的每一步都有洗涤过程，因而除去了未反应物质和干扰物质。利用ELISA(酶联免疫吸附分析)方法不仅可以定性而且可以定量检测样品中的农药残留，这种分析方法对仪器设备要求不高，快速简便，一般无需对样品进行复杂的预处理，灵敏度高，特异性强，而且价格便宜，适于大容量样本分析。20世纪80年代后，免疫化学分析技术已成为优先研究、开发和利用的农药残留快速检测技术，美国化学学会将免疫分析方法与GC、HPLC方法一起列为化学农药残留分析的三大支柱技术，是21世纪最具竟争性和挑战性的超微量检测技术。

半抗原是指只有反应原性不具免疫原性的物质，又称不完全抗原。通常，具有免疫原性的物质分子量应大于10000，而农药的分子量一般均小于1000，一般不能刺激机体产生针对农药抗原决定簇的特异性抗体，因此必须与大分子载体偶联后才具有免疫原性，这也是小分子免疫分析的基本模式。半抗原的结构对抗体的特异性至关重要，半抗原分子的设计与合成是小分子免疫分析技术的关键所在。半抗原分子的设计应以农药亲体以及有毒理学意义的代谢产物的分子结构为目标化合物，针对被测定对象是单一农药或某一类农药，设计中应相应地突出特定农药的分子结构或一类农药中共有的基本分子构架(即母核)。一般理想的半抗原分子应尽量具备与待测物类似的立体化学特征，以减少免疫交叉反应性，提高抗体的特异性；同时，要保证半抗原与载体的大分子复合后，半抗原的特征结构能最大限度地被免疫活性细胞所识别，以制备出具有预期特异性和高亲和力的抗体。

人工抗原是半抗原与大分子载体蛋白偶联得到的完全抗原。使用载体不是简单地增加半抗原的分子量，更重要的是利用其较强的免疫原性诱导机体产生免疫应答，从而使机体产生针对半抗原及人工抗原的特异性抗体。

免疫分析技术的关键是半抗原的分子设计、合成、人工抗原及抗体的制备。因此，目标分析物免疫学特性，以及如何通过化学或生化技术突出和利用这些特性，是该领域重要的研究内容。

目前在农产品和食品监管中急需一种简易快速有效的检测农药速灭威残留的方法。本发明的目的是通过设计合成具有3-甲基苯结构的农药速灭威的半抗原和人工抗原制备高特异性的抗体，进而建立免疫检测方法，实现速灭威的快速检测。本发明的独特之处在于突出了这类农药分子特异性抗原决定簇，又克服了化学合成的困难，免疫动物产生亲和性很高的特异性抗体。

发明内容

本发明设计合成了小分子目标分析物的半抗原，并与载体蛋白质偶联，制备人工抗原，免疫动物制备对小分子分析物有高度特异性抗体，利用抗原抗体的特异性免疫学反应和易被检测识别的标记物的放大作用，定性定量的检测样本中超微量小分子目标物。该技术研究的关键是半抗原的分子设计，合成人工抗原及抗体的制备。

速灭威的结构如图所示：