[发明专利]一种抗猪瘟转移因子的制备

权利要求书

1、一种抗猪瘟病转移因子的制备方法，步骤包括：

(1)先用注射用水洗净用猪瘟病病毒抗原免疫过的猪脾脏，去其表面的筋膜、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗；

(2)将洗净的猪脾脏剪碎，加入1～2倍冷的10mmol PBS缓冲液，用高速组织捣碎机1000～3000rpm捣碎3～5次，每次3～5min，制得猪脾匀浆液；

(3)猪脾匀浆液用超声波(4KW、3KHz)处理5～10min；

(4)将步骤(3)中得到的匀浆液用HCl调pH5.0～6.0或者加入0.1～0.3％柠檬酸，4℃，3000～8000rpm离心10～30min，收集上清液；

(5)上清液用0.2μm中空纤维柱微滤，滤出液再用截留分子量为6000道尔顿的中空纤维柱超滤，收集滤出液；

(6)将超滤得到的滤液用0.22μm滤膜进行无菌过滤，即得到抗猪瘟病病毒转移因子原液，4℃保存。

2、权利要求1所述的方法，其中在实施上述步骤之前，还包括制备病毒抗原、提取病毒抗原、病毒抗原免疫猪等步骤。

3、权利要求2所述的方法，其中所述的制备病毒抗原步骤，包括：将猪瘟病病毒接种于9～11日龄鸡胚尿囊液30～40℃培养24～72h。取鸡胚尿囊液，-20℃反复冻融4～8次，3000～8000rpm离心10～30min，弃去沉淀收集上清液。

4、权利要求2所述的方法，其中所述的提取病毒抗原步骤，包括：上清液用蔗糖密度梯度离心纯化提取病毒，蔗糖浓度为10％～80％，150000～200000rpm离心2～4小时，根据猪瘟病病毒分子量确定猪瘟病病毒所在离心管的位置，吸出备用。

5、权利要求2所述的方法，其中所述的病毒抗原免疫猪步骤，包括：挑选健康免疫猪，将上述提取的病毒抗原皮下多点注射免疫猪，共免疫3～5次。每次免疫间隔一周，最后一次免疫7～10天后取猪静脉血，以免疫荧光法或ELISA法检测上述病毒的特异性抗体效价，出现病毒特异性免疫效价后，宰杀猪，取脾脏于-20℃保存，备用。

6、权利要求1或2所述的方法，其中猪瘟病毒株选自本申请人保藏的CSFV39(Genbank accession NO.J04358)和/或BVDV(Genbank accession NO.U63479)。