[发明专利]表达新城疫病毒NP基因的重组T4噬菌体的构建及其应用

权利要求书

1.含有新城疫病病毒核壳蛋白基因(NP)的重组T4噬菌体的构建方法，其特征在采用基因重组的方法获得的，其方法是：用Hind III和Not I在37℃分别消化NP基因的PCR产物和质粒pET30a，接着在T4连接酶的作用之下，连接消化的NP基因的PCR产物和质粒pET30a，用连接产物转化大肠杆菌DH_5α，经Amp′抗性筛选，获得插入了NP基因的重组子，然后用1对通用引物进行PCR筛选；对PCR筛选阳性的细菌，挑取单菌落接种于3mL。

LB培养基中，37℃，200r/m振摇培养16-20小时，抽提质粒，再经限制性内切酶消化和序列测定，获得含有新城疫病病毒核壳蛋白基因(NP)的重组整合质粒pET30a-NP；用重组整合质粒pET30a-NP和缺陷性T4噬菌体T4-Z1进行同源重组，获得表达NP蛋白的重组T4噬菌体。

2.含有新城疫病毒NP的重组T4噬菌体，其特征在于：

(1)重组T4噬菌体具有序列表中NP的核苷酸序列，由1747个碱基对组成，是NDV主要结构蛋白NP的编码基因，序列1和T4噬菌体soc基因组成融合基因，该融合基因位于重组T4噬菌体溶菌酶基因(e)和den V基因之间，该序列采用PCR方法可以扩增出特异性条带。

(2)本发明提供的重组T4噬菌体还包括具有NP等同基因的T4噬菌体。NP等同基因，是与NP基因的核昔酸序列或氨基酸残基序列相比有一个或若干个核昔酸或氨基酸残基的差别，包括碱基或氨基酸残基的改变、缺失、添加、或插入，或与NP基因序列中的连续200碱基以上的区段有80％以上的同源性。

3.含有新城疫病病毒NP蛋白的重组T4噬菌体的应用，是将所述的重组T4噬菌体作为抗原，应用于包括但不限于AGP、ELISA，检测鸡血清中的ND特异性抗体。