[发明专利]猪瘟活疫苗ST细胞培养方法无效
| 申请号： | 200810154576.8 | 申请日： | 2008-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN101492657A | 公开（公告）日： | 2009-07-29 |
| 发明（设计）人： | 张桂红;杨保收 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300300*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪瘟 疫苗 st 细胞培养 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于猪瘟活疫苗ST细胞培养的方法，包括：
1)通过兔体免疫HCV，采集定型热反应兔的脾脏作毒种；
2)制备ST单层细胞，并加入细胞生长液，置37℃转瓶培养箱内培养；
3)将采集定型热的兔脾以0.2％～0.3％的浓度接种ST单层细胞上，再加入细胞生长液置37℃转瓶培养箱内培养；
4)培养5天后进行病毒液1收，以后每隔4天进行一收，所收获的病毒液经过真空冷冻冻干，即成猪瘟活疫苗。
2.权利要求1所述的方法，其中所述的兔为经过检验的自繁大耳试验白兔，所述的ST细胞系购自中国兽医监察所，经检验过无支原体和外原病毒污染。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述的细胞生长液为MEM培养基，在使用MEM培养基前，将每代9.4克MEM粉剂、2.2克NaHCO3溶于1L水中，调解PH值至7.2备用，再往每升所配制好的MEM培养基中加入20ml经检测BVDV为阴性的南京苏邦血清，就变为细胞生长液。
4.权利要求3所述的方法，所述的血清是南京苏邦血清，并经过56℃灭活(以及无菌过滤)等处理。
5.权利要求1或2或3的方法，其中步骤1还包括在37℃下，使用含有0.25％浓度胰蛋白酶，0.02％浓度EDTA来消化单层细胞10min分钟。
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