[发明专利]猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒的三联疫苗

权利要求书

1.一种制备猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒三联疫苗的方法，包括：

1)将已长成90％单层的宿主细胞系分别接种猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒，并加入细胞维持液，在37℃下培养；

2)当细胞病变(CPE)达到75％以上后，收集病毒。可保存于-20℃，备用；

3)将各病毒按10^-6.5的TCID₅₀以1∶1∶1混合，同时加入弗氏完全佐剂和免疫加强剂，37℃甲醛灭活24h；

4)加入油佐剂配制成水一油一水剂型的疫苗。

2.权利要求1的方法，用于猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)接种培养的宿主细胞系是猪睾丸细胞(ST)细胞系、用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)接种培养的宿主细胞系是Vero细胞系、用于轮状病毒(RV)接种培养的宿主细胞系是Mac-145细胞系，其中所述的ST细胞系购自中国兽医监察所，经检验过无支原体和外原病毒污染；Vero细胞系和Mac-145细胞系本公司保藏。

3.权利要求1或2的方法，其中步骤1)中使用EDTA-胰蛋白酶消化单层细胞，有利于细胞分散。

4.权利要求1或2的方法，其中步骤1)中传代细胞培养中所用的细胞维持液为MEM培养基，在使用MEM培养基前，将每代9.4克MEM粉剂、2.2克NaHCO₃溶于1L水中，调解PH值至7.2备用，再往每升所配制好的MEM培养基中加入20ml经检测BVDV为阴性的南京苏邦血清，就变为细胞维持液。

5.权利要求4的方法，其中对细胞维持液中MEM培养基进行无菌过滤处理，避免细菌污染，不破坏MEM培养基中的营养成分。