[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的光激化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B₁的光激化学发光免疫分析试剂盒，黄曲霉毒素B₁简 称AFB₁，其特征是由白色不透明微孔板(1)，AFB₁标准(2)，连接AFB₁-BSA 人工抗原的发光微粒(3)，兔抗AFB₁的抗体冻干品(4)，生物素化羊抗兔抗体 冻干品(5)和包被有链霉亲和素的感光微粒(6)组成。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是连接AFB₁-BSA人工抗原的发 光微粒(3)的制备：在离心管中加入1mg发光微粒，加入12.5μL质量浓度 1％的Tween-20，0.05mg AFB₁-BSA人工抗原，10μL硼氢化氰钠，用0.1M、 pH 6.0的2-(N-吗啉)乙磺酸MES缓冲液将体积补充到200μL，37℃避光振荡反 应48小时；加入10μL0.3M、pH 5.0的羧甲氧基胺半盐酸盐CMO溶液封闭未 结合位点，37℃避光孵育1小时后离心，分离得到已连接AFB₁-BSA的发光微 粒，稀释后备用。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是AFB₁标准(2)，从AFB₁纯品 中稀释得到，稀释液为甲醇∶水体积比3∶7，AFB₁标准共6瓶，AFB₁浓度分 别为：0ng/mL，0.05ng/mL，0.5ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，100ng/mL。

4.一种用权利要求1所述的试剂盒检测AFB₁的方法，其特征是取包被有 AFB₁-BSA人工抗原的发光微粒加入到白色不透明微孔板；加入AFB₁标准或处 理好的样品到各自的微孔中，然后各孔顺序加入兔抗AFB₁抗体、生物素化羊抗 兔抗体进行标记免疫反应；接着暗处加入包被有链霉亲和素的感光微粒进行反 应后检测光信号，以加入AFB₁标准的检测数据绘制标准曲线，以加入被测样品 的检测数据从标准曲线计算样品中的AFB₁含量。

5.根据权利要求4所述的检测AFB₁的方法，其特征是操作为：取20μL 包被有AFB₁-BSA人工抗原的发光微粒加入到白色不透明微孔板；加入20μL的 AFB₁标准或处理好的样品到各自的微孔中；加20μL兔抗AFB₁抗体；继续加 入20μL生物素化羊抗兔抗体，37℃孵育15分钟；暗处加175μL包被有链霉亲 和素的感光微粒，37℃暗处孵育15分钟后在光激化学发光检测仪上检测光信号， 从标准曲线计算样品中的AFB₁含量。

6.根据权利要求4所述的检测AFB₁的方法，其特征是样品处理，玉米样 品处理：将样品粉碎至20目，取5克样品放在试管中，加入提取液12.5mL，提 取液为甲醇∶水体积比7∶3，加塞振荡3分钟，过滤，滤纸采用新华1号纸， 取1mL滤液用1mL蒸馏水或去离子水进行稀释，备用。