[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的光激化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

一种黄曲霉毒素B₁的光激化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法，属于 光激化学发光免疫分析(LICLIA)技术领域，用于对饲料，谷物及其制品中 AFB₁含量的检测。

背景技术

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是真菌黄曲霉Hspergillus flavus和寄生曲霉 A.parasilicus菌株产生的一组强毒性的次生代谢产物，尤其是AFB₁为强污染 物质，分布范围广，能引起人类、各种饲料动物的急性中毒死亡，还能引起 致癌，致畸，致突变，即使几十μg/kg的含量仍有很大的毒性。食品和饲料 中黄曲霉毒素1mg/kg以上有剧毒。其毒性为氯化钾的10倍，为砒霜的68 倍。食用被黄曲霉毒素污染严重的食品后可出现发热，腹痛，呕吐，食欲减 退，严重者在2～3周内出现肝脾肿大，肝区疼痛，皮肤黏膜黄染，腹水，下 肢浮肿及肝功能异常等中毒性肝病症状，也可能出现心脏扩大，肺水肿，甚 至痉挛，昏迷等症。由于不易防止食物被真菌污染，因此人们对长期食用低 剂量黄曲霉毒素污染的可能性非常关注。由于黄曲霉毒素特别是B₁是潜在的 致癌物质，人长期接触低剂量的黄曲霉毒素可能会有影响，1988年国际癌症 研究机构将AFB₁列为1A类致癌物质。

AFB₁是最强的致癌物质，它在食物中的法定限量非常低，其限量标准 为2μg/kg。欧盟委员会对婴幼儿食品中的毒素限量标准进行了补充。草案规 定，在包括谷类食品在内的婴幼儿食品中，毒性最大的AFB₁的最大限量为 0.05μg/kg。

目前AFB₁的测定方法有多种，如：薄层色谱法TLC(灵敏度为5μg/kg)， 高效液相色谱法HPLC(灵敏度为0.02μg/kg)，但由于费时，灵敏度低，仪 器设备昂贵，操作复杂且不适用于大批量样品的检测等缺点。酶联免疫测定 法(ELISA)，由于其特异性强，灵敏度高，操作简便，不需直接接触毒素，且 特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们重视和采用。

光激化学发光免疫分析(LICLIA)是以纳米级高分子微粒为基础的新一 代化学发光技术，该项技术将被广泛地应用于研究生物分子的相互作用。其 主要原理是由光激发产生的均相化学发光技术。它具有快速、均相(免冲洗)、 高灵敏和操作简单的特点。LICLIA试剂由含有感光化合物的感光微粒和含 有发光化合物的发光微粒组成，微粒直径约188nm，表面覆盖多糖水凝胶。 水凝胶能减少非特异性结合，同时，增加微粒的悬浮性。微粒通过水凝胶表 面的功能团与生物分子共价连接。纳米级微粒大大增加了反应的表面积，每 个微粒的表面包被着成百上千个生物分子，可捕获目标分子。

LICLIA技术的核心原理是单线态氧的产生和传递。在受到红色激光(680 nm)照射后，感光微粒能使周围环境中的氧转化为单线态氧，单线态氧的生 存时间仅为4微秒。短暂的生存时间决定了单线态氧的传播直径很小(约为 200nm)。如果发光微粒在200nm范围之内就能接受单线态氧，并发出高能 级的光(520nm-620nm)。相反，如果在200nm直径范围内没有发光微粒， 单线态氧就会回落到基态氧而没有信号产生。这种依赖于两种微粒相互接近 的化学能量传递是LICLIA均相反应的基础。通常在该反应体系中，微粒的 浓度是很低的。两种微粒相互随机碰撞的几率很低，因此，反应体系的本底 非常微弱。如果包被在微粒表面的生物分子相互作用，拉近了两个微粒的距 离，例如形成免疫夹心或受体-配体复合物，这样就能产生能量的有效传递并 发出光信号。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测AFB₁的试剂盒及其检测方法，采用光 激化学发光免疫分析法(LICLIA)检测AFB₁，用于对饲料、谷物及其制品 中AFB₁含量的检测。