[发明专利]生物膜深度处理饮用水源苯并芘方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及深度处理饮用水源苯并芘(BaP)特效菌Fhhh生物膜技术方法。

二、背景技术

国内外已有深度处理饮用水源的生物膜工程技术，典型的如德国缪尔海姆水厂；法国梅里苏瓦兹水厂；中国上海周家渡水厂等。国际上也有降解苯并芘[benzo(a)pyrene，BaP]的特效菌株，如美国(J.Schneider，1996)Mycobacterium sp.RJG II-135，美国(J.A.Rentz，2008)Sphingomonas yanoikuyae JAR02等。但是没有深度处理饮用水源BaP的原生质体融合菌株生物膜技术株专利，原生质体融合菌株深度处理BaP目前仍是空白。BaP是一种强致癌性的持久性有机污染物(persistent organicpollutants，POPs)，如YZNJ饮用水源中含有25种POPs有机污染物，其中BaP达0.024μg/L；经过传统的化学絮凝沉淀处理生产的自来水中BaP为0.022μg/L。饮用水中BaP致癌风险最低阈值为0.0029μg/L(美国环保局，2008)。

国内外已有深度处理饮用水源生物膜工程技术，典型的如德国缪尔海姆水厂；法国梅里苏瓦兹水厂；中国上海周家渡水厂等。但是，未见应用生物膜深度处理饮用水源强致癌污染物苯并芘(BaP)的技术专利。

BaP是一种强致癌性的持久性有机污染物(persistent organic pollutants，POPs)，如YZNJ饮用水源中含有25种POPs有机污染物，其中BaP达0.024μg/L；经过传统的化学絮凝沉淀处理生产的自来水中BaP为0.022μg/L。饮用水中BaP致癌风险最低阈值为0.0029μg/L(美国环保局，2008)。

本发明是为了应用特效菌生物膜技术高效去除饮用水源中BaP，使生产的自来水水中BaP达到饮用水标准，消除及降低饮用水中BaP的致癌风险威胁，保护人体健康。

本申请人的中国专利申请号CN02138171.0为两真菌与一细菌原生质体融合的特效菌株，即Fhhh特效菌株，是本申请发明人的原创性科研成果，由白腐真菌(亲株1)真核细胞、土著细菌YZ1(亲株2)原核细胞、酿酒酵母(亲株3)真核细胞的两界细胞原生质体，跨界融合构建而成。通过3个亲本菌株两界细胞的原生质体跨界融合、基因整合、鉴定筛选，从而获得兼具3个亲本菌株优势特征于一体的基因工程Fhhh特效菌株，为深度降解饮用水源BaP提供功能基因的整合资源。国际法公认原生质体融合构建的新物种/菌株，不存在基因污染问题，所以Fhhh特效菌株也不存在基因污染问题。菌株的保藏号是CGMCC No.0783。

(1)Fhhh特效菌液体培养基配方

1000ml液体培养基中：3g K₂HPO₄；1g KH₂PO4；0.5g NH₄NO₃；0.1g Na₂SO₄；10mgMgSO₄·7H₂O；1mg MnSO₄·4H₂O；0.5mg CaCl₂；1mg FeSO₄·7H₂O；5g CH₃COONa；5g酵母浸膏；10g蛋白胨；10g葡萄糖；200g马铃薯浸出汁，调pH至7.0，121℃、103kPa、湿热灭菌20min。最适培养温度：33±2℃；最适pH：7.0。

(2)三种固体鉴别培养基(SIM1、SIM2、SIM3)配方

固体培养基SM＝Fhhh特效菌液体培养基+1.5％琼脂糖。

SIM1＝SM+100u链霉素/ml(streptomycin，Sm)—真菌亲株只能在SIM1上生长。

SIM2＝SM+100u制霉菌素/ml(nystatin，Nt)—细菌亲株只能在SIM2上生长。

SIM3＝SM+Sm100u/ml+Nt100u/ml(Sm+Nt)—只有跨界融合产物能在SIM3上生长。

(3)两次跨界融合：