[发明专利]人脑钠素非竞争双抗体夹心法ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测人脑钠素(BNP)的酶联免疫(ELISA)试剂盒，尤其涉及一种成本低廉的人脑钠素非竞争双抗体夹心法ELISA检测试剂盒。

背景技术

人脑钠素(BNP)是一种具有排钠、利尿、舒张血管作用的神经肽类激素，与心房利钠肽同属循环利钠肽家族。BNP在心血管疾病中是一很有价值的标志物，临床研究亦证实BNP与急、慢性心衰、原发性高血压等多种心血管疾病的早期诊断、鉴别诊断、危险分层、预后评价及治疗关系密切。特别是对由充血性心力衰竭引起心源性呼吸困难与肺源性呼吸困难起到鉴别诊断意义。未来在分子水平及细胞水平上对BNP的产生机制、作用机制和代谢机制的深入研究，将为BNP用于心血管疾病的临床治疗提供更好的依据。

美国FDA、欧洲心脏学会相继把BNP作为临床心功能分级的重要指标，可见对脑钠素进行快捷、准确的检测对于指导临床科学用药、有效判断预后，提高患者生活质量具有重要意义。目前，临床上检测BNP通常运用抗BNP单克隆或多克隆抗体建立起来的免疫学测定方法，如放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)，微粒子酶免疫法(MEIA)，荧光免疫法(FIA)等。但一些方法存在放射性污染，一些方法所需试剂、仪器依靠进口，成本昂贵，另外，由于不同的方法学上的差异导致了各实验室检测结果的不一致，即便一些著名实验室测定结果的变异系数也很大(CV>10％)，这大大限制了其在临床上广泛应用。

目前，临床上检测BNP的方法及产品良莠不齐，不同实验室对同一份样品的测定值差别很大，对判断测定值的临床意义造成了困难。因此，首先应针对各种测定方法建立相应的正常人及各种病理状态下的测定参考值范围。而就现状而言，BNP检测方法的标准化已成为亟待解决的问题之一，开发一种廉价、高效、易于推广使用的BNP检测试剂盒，满足不同级别临床检测的需要，是现实亟待解决的课题。

ELISA酶免法作为临床检测常用的方法，已延伸到许多学科领域，与以往的单纯酶免技术相比，如今已发展衍生多种形式，使得检测方法更具有省时省力，特异性强、灵敏度高等优点。因此，研制和开发一种高效、可靠的人脑钠素酶免检测试剂盒是目前基础临床诊断所迫切需求的。

发明内容

针对现有临床上检测BNP的现状，本发明要解决的问题是提供一种廉价、高效、易于推广使用的人脑钠素非竞争双抗体夹心法ELISA检测试剂盒，以满足不同级别临床检测的需要，为早期发现、早期诊断和早期治疗心血管疾病提供一种方便、准确的临床检测方法以及检测试剂盒。

本发明的设计思路是：人类血浆标本中的BNP含量低(皮克级)，因此，本研究采用双单克隆抗体夹心ELISA法，来检测人类血浆标本中的BNP含量。

下面对本发明所述人脑钠素检测试剂盒进行详细的描述：

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其它物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，通过反应而结合在固相载体上。此时固相上酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA过程包括固相载体吸附抗体(抗原)，又称为包被，加待测抗原(抗体)，再与相应的酶标记抗体(抗原)进行抗体抗原的特异性反应，生成抗体(抗原)一待测抗原(抗体)—酶标记抗体(抗原)的复合物，最后再与该酶的底物反应生成有色产物。待测抗原(抗体)的定量与有色产物成正比。因此，可以借助于光吸收率来计算抗原(抗体)的量。

基于上述基础，本发明试剂盒的检测原理采用BNP—32肽单克隆抗体包被于酶标板，若待测标本中含有proBNP和(或)BNP-32抗原，该抗原则与其相应的包被单抗相结合，再加入与之配对的辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，用TMB作底物显色，用硫酸中止反应后，于450nm处测各孔A值，根据A值大小进行BNP定性定量检测。