[发明专利]禽流感疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种家蚕重组杆状病毒BmHA，该病毒保藏在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.2316。

2.一种权利要求1所述家蚕重组杆状病毒BmHA的制备方法：

(1)通过PCR扩增的方法获得由杆状病毒囊膜蛋白gp64信号肽基因序列、 禽流感病毒主要抗原基因HA序列和杆状病毒囊膜蛋白gp64跨膜域基因序列构 建而成的重组基因；

(2)在步骤(1)所得重组基因的5’和3’端分别引入BamH I和Not I 酶切位点后，连接到家蚕杆状病毒载体pBacPAK8，使重组基因置于多角体蛋白 基因启动子控制之下，构建成重组质粒；

(3)取步骤(2)所得的重组质粒和经Bsu36I酶切的病毒BmBacPAK6的 DNA，加入无血清的培养基混匀制成pBacHA混合液；

(4)取Dosper，加入无血清的培养基，混匀制成Dosper混合液；

(5)将培养BmN细胞用无血清的培养基洗涤后，逐滴加入上述制备的 pBacHA混合液和Dosper混合液，27℃培养；

(6)收取培养皿中的上清，感染BmN细胞，琼脂糖培养；

(7)挑取噬斑，分组感染BmN细胞，保存上清；

(8)感染的BmN细胞DNA用于Southern blot斑点杂交；

(9)取保存的斑点杂交中阳性克隆细胞的上清进行噬斑筛选；

(10)取噬斑筛选的阳性克隆细胞的上清感染家蚕细胞。

3.一种权利要求1所述的家蚕重组杆状病毒BmHA表达的蛋白，其氨基酸 序列如SEQ ID NO：10所示。

4.一种权利要求3所述蛋白的制备方法：

(1)将权利要求1所述的家蚕重组杆状病毒BmHA感染BmN细胞进行病毒 扩增，

(2)针刺接种法接入家蚕五龄起蚕及蛹，

(3)收集表达的权利要求3所述蛋白。

5.一种权利要求1所述家蚕重组杆状病毒BmHA在制备动物禽流感疫苗中 的应用。

6.一种权利要求3所述的蛋白在制备动物禽流感疫苗中的应用。