[发明专利]聚核苷酸组合物佐剂

说明书

技术领域

本发明属生物医药领域，涉及聚核苷酸组合物佐剂，即聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸PIC、卡那霉素组合物佐剂。提供了安全、有效，低廉的佐剂及免疫原组合物，包括佐剂的组分，含量，免疫原物质，免疫途径，免疫对象等。用于人和动物的预防性疫苗，治疗性疫苗，抗毒素，抗血清的制备。

技术背景

免疫佐剂随着疫苗的研究而发展起来。1926年，Glenny用铝盐作为佐剂应用于白喉类毒素；1937年，Freund发展了福氏完全佐剂。佐剂与抗原同时应用，能非特异地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，增强该抗原的免疫原性，而佐剂本身并无抗原性。佐剂能提高疫苗质量，降低成本，提高产量。不仅细胞内寄生病原体疫苗，重组弱免疫原性疫苗需要佐剂，传统纯化疫苗同样需要佐剂。广为应用的铝佐剂只能诱导体液免疫，不能有效地诱导细胞免疫，且对蛋白亚单位等疫苗诱导抗体产生的能力较弱，故新佐剂的研究异常活跃。目前，数百种天然和合成的物质被证实有佐剂活性，因为安全性，成本等问题，只有铝佐剂被FDA批准用于人。欧盟近年批准了AS04用于乙肝疫苗，意大利批准了MF59用于流感亚单位疫苗。

免疫应答是机体免疫系统对抗原刺激产生的以排除抗原为目的的生理过程，包括抗原递呈、淋巴细胞活化、免疫分子形成及免疫效应发生等一系列反应。免疫系统由胸腺、脾脏和淋巴组织等组成，当病原体侵入人体后，首先启动的是天然免疫反应，如天然杀伤细胞、单核一巨噬细胞可对其进行攻击并杀灭之，这种免疫反应是非特异性的。随着人体免疫系统对病原体的识别，启动了针对病原体的免疫反应，即获得性特异免疫反应，包括特异性体液免疫和特异性细胞免疫。前者产生特异性的免疫球蛋白，后者主要产生一些杀伤性T淋巴细胞及细胞因子用以杀死入侵的病原体。

B淋巴细胞直接识别抗原，经辅助因子刺激增殖分化产生特异性抗体，中和毒素，促进巨噬细胞吞噬，介导体液免疫。T细胞介导细胞免疫。T细胞不能直接识别抗原，只能识别经抗原提呈细胞APC加工、处理后的抗原肽。APC被抗原激活后，产生IL-12，IFN-α等，刺激NK细胞产生IFN-γ；上调APC表面的MHC及共刺激分子的表达，递呈抗原，Th细胞激活后增殖分化成Th效应细胞。CD4⁺T细胞被MHCII-抗原肽活化后，分化成Th1和Th2细胞亚群。Th1反应的特征是分泌IFN-γ、IL-2等，IFN-γ活化巨噬细胞，介导细胞免疫；IL-2辅助B细胞产生鼠IgG2a、人IgG，诱导人IgG抗胞内病原体免疫。Th2反应的特征是分泌IL-4等，辅助B细胞产生鼠IgG1、人IgE，诱导人IgE抗寄生虫免疫。CD8⁺T细胞被MHC I-抗原肽激活后，产生IL-2，刺激细胞毒T细胞CTL增殖分化，激活CTL；Th1产生的IL-2间接刺激CTL。特异性细胞免疫的效应细胞主要是Th1型CD4⁺T和CD8⁺CTL细胞，前者经活化巨噬细胞，诱生免疫炎症；后者藉分泌细胞毒素及诱导细胞凋亡，以杀死带抗原的靶细胞。特异的细胞免疫应答在清除胞内病原体感染及抗肿瘤免疫反应中起重要作用。在Th细胞分化过程中，细胞因子是影响Th1/Th2极化的重要因素。活化APC产生的IL-12，IFN-α刺激NK细胞产生IFN-γ，诱导Th1分化和IFN-γ等产生，IFN-γ进一步激活MΦ细胞增强其产生IL-12的能力；Th1细胞因子促进CTL分化，并诱导人IgG抗体产生。IL-12，IFN-α等细胞因子促使Th1及CTL分化，在诱导体液免疫和细胞免疫应答中起重要作用。机体通过免疫应答，达到清除“抗原异物”的目的。

免疫佐剂可刺激抗原递呈细胞APC，释放细胞因子和趋化细胞因子，能募集这些细胞到局部组织和淋巴结，增强体液免疫及细胞免疫。理想的免疫佐剂除了能增强体液免疫应答外，还能增强由Th1和CD8⁺T介导的细胞免疫应答。PIC能诱导抗原提呈树突细胞DC成熟，维持DC分泌高水平IL-12^[1]；产生IFN—α^[2]，高表达MHC和共刺激分子^[1]，诱导T细胞增殖；并有效的提呈MHC-I多肽抗原，诱导较强的CTL反应^[3]；可活化NK细胞，增强IgG2a及IgG1的产生^[4]。