[发明专利]一种速溶冻干纤维蛋白原和凝血酶制剂组合物、制备方法及其用途

权利要求书

1.一种速溶冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：所述组合物包括：

组合物1和组合物2；

组合物1包括纤维蛋白原冻干粉和纤维蛋白原溶解液，

组合物2包括凝血酶冻干粉和凝血酶溶解液；按mg/ml计：

组合物1的浓度为：纤维蛋白原35～70、柠檬酸钠9～15、氯化钠7～12、聚山梨酯 -80 0.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和谷氨酸3.5～5.5；

组合物2的浓度为：凝血酶700～1200单位/ml，右旋糖酐20 3～6，甘氨酸15～25、 氯化钠5～7和氯化钙4～7。

2.一种如权利要求1所述的速溶的冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：

组合物1的浓度为：纤维蛋白原45～70、柠檬酸钠10～12.5、氯化钠8～10、聚山梨 酯-80 0.4～0.6、甘露醇10～12、精氨酸5～7和谷氨酸4～5；

组合物2的浓度为：凝血酶800～1150单位/ml、右旋糖酐20 3～6、甘氨酸15～25、 氯化钠6～7和氯化钙5～6。

3.一种如权利要求1或2所述的速溶的冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：

组合物1的浓度为：纤维蛋白原50，柠檬酸钠12，氯化钠9，聚山梨酯-80 0.5，甘 露醇12、精氨酸6和谷氨酸4.8；

组合物2的浓度为：凝血酶1000单位/ml，右旋糖酐20 4.5，甘氨酸25、氯化钠6和 氯化钙5.5。

4.一种如权利要求3所述的速溶冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：组合物1的pH 值为7.4～7.8。

5.一种如权利要求3所述的速溶冻干纤维蛋白封闭剂组合物，其特征在于：组合物2的pH 值为5.8～6.3。

6.上述任一权利要求所说的速溶冻干纤维蛋白封闭剂组合物的制备方法，其特征在于： 所说组合物1和组合物2的制备方法如下：

(1)组合物1中纤维蛋白原冻干粉的制备方法：

①每ml猪全血中加入抗凝剂柠檬酸钠3.8mg，以3500转/分、0～4℃低温离心30分钟， 0.2μm微孔滤膜过滤得滤液；

②所得滤液降温至-2℃，加入预冷至-20℃的低温乙醇分步分离得纤维蛋白原沉淀物；

③按每g所得纤维蛋白原沉淀加入每毫升含柠檬酸钠12mg和氯化钠9mg的溶解液2ml， 使其完全溶解，加入聚山梨酯-80 10mg和磷酸三丁酯3mg，用1％NaOH调至pH7.0；

④24～28℃下搅拌8小时灭活脂包膜病毒；

⑤降温至-2℃，加入预冷至-20℃的低温乙醇分离沉淀，将纤维蛋白原按每g沉淀用每毫 升含氯化钠9mg和柠檬酸钠6mg的溶解液2ml溶解，加入聚山梨酯-80 0.2mg和甘露 醇12mg；

⑥0.2μm微孔滤膜除菌过滤、-70℃冷冻、1-10pa真空干燥；

⑦对所得冻干后的纤维蛋白原于95～105℃干热灭活30分钟；

(2)组合物1的纤维蛋白原溶解液的制备

①取精氨酸5mg用无热原蒸馏水1ml溶解；

②再加入谷氨酸4mg搅拌溶解，溶液应为pH7.4～7.8；

③0.2μm微孔滤膜除菌过滤；

④对所制得的纤维蛋白原溶解液于95～105℃干热灭活30分钟；

(3)组合物2的凝血酶冻干粉的制备

①按1ml猪全血中加入草酸钠13.4mg的比例加入草酸钠，3500r/min离心30min分离出抗 凝猪血浆；

②按每ml所得血浆加入硫酸钡0.1g的比例加入硫酸钡吸附凝血酶原，使用纯化水洗涤沉 淀；

③每1g沉淀用1ml的0.3mg/ml柠檬酸钠溶液洗脱，每毫升洗脱液加入组织凝血活酶5mg 和氯化钙3mg，将凝血酶原激活成为凝血酶，离心去沉淀；截留分子量10万超滤去除 大分子蛋白

④在每ml溶液中加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg；

⑤于24～28℃搅拌8小时S/D灭活病毒，截留分子量2万超滤洗涤纯化，浓缩得凝血酶 溶液；

⑥在上述每ml凝血酶溶液中加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2μm微孔除菌过 滤，-70℃冷冻1-10pa真空干燥；

⑦将冻干后的凝血酶于95～105℃干热灭活30分钟；

(4)组合物2的凝血酶溶解液的制备：

①取氯化钠6mg，氯化钙55mg，用无热原蒸馏水1ml溶解，除菌过滤，分装；

②将分装后凝血酶溶解液于95～105℃干热灭活30分。