[发明专利]一种用于口腔黏膜白斑组织的检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学的领域，具体涉及一种用于口腔黏膜白斑组织(Oral Leukoplakia) 的检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

口腔黏膜白斑(Oral leukoplakia，OLK)是中老年人较常见的口腔黏膜病，好发于唇、 颊、舌、腭等黏膜上，一般无自觉症状，初起时呈乳白色斑块，表面光滑、平或稍高出正常 黏膜。由于口腔白斑与WHO1972年公布的癌前病变概念相符[李秉琦主编，口腔粘膜病学(第 二版)[M]，北京：人民卫生出版社，2000，88-92]，因而被公认为口腔斑纹类疾病中最具典 型性的癌前病变之一，其癌变率约为3-5％。1994年，流行病学家、临床学家及病理学家在 瑞典的乌普萨拉(Uppsala)对口腔白斑病的概念及相关问题再次进行了修订，并于1996年 正式公布。该决议将口腔白斑病定义为：口腔白斑病是口腔黏膜上以白色为主的损害，不具 有其他任何可定义的损害特征，一些口腔白斑病可转化为癌。根据检查环境和诊断手段的差 异，可将口腔白斑病的诊断分为暂时性(provisional)和肯定(definitive)诊断两个阶段。如 果一种白色的黏膜损害在临床上不能诊断为任何其他的疾病，即可做出暂时性诊断的结论； 假如暂时性诊断中的白色损害被怀疑与某种因素有关，而这种因素又有消除的可能，但消除 后损害持续存在的病例，或通过组织病理学检查的方法给予鉴定即为肯定性检测。

目前，对口腔黏膜白斑的检测以组织病理学检查为主，该方法具有对患者的组织黏膜破 坏面积大、诊断不准确的缺点[Kondoh N，Ohkura S，Arai M，et al.Gene expression signatures that can discriminate oral leukoplakia subtypes and squamous cell carcinoma.Oral Oncol.2007 May；43(5)：455-62]。

发明内容

本发明为了解决现有口腔黏膜白斑的检测方法具有对患者的组织黏膜破坏面积大、诊断 不准确的缺点，提供了一种用于口腔黏膜白斑组织的检测试剂盒及其使用方法。

本发明采用如下技术方案实现：一种用于口腔黏膜白斑组织的检测试剂盒，其特征在于 由以下试剂组成：TRIZOL、氯仿、异丙醇、乙醇、Oligo(dT)₁₅、试剂I、试剂II、试剂III-a、 试剂III-b、试剂III-c和试剂III-d。

其中，试剂I由MgCl₂、Tris-HCL+KCL、RNase Free dH₂O、dNTP Mixture、RNase Ihibitor、 AMV Reverse Transcriptase XL组成；

试剂II由Tris-HCL+KCL、灭菌蒸馏水、TaKaRa EX Taq HS组成；

试剂III-a为基因GDF-15的PCR引物，试剂III-b为基因NF-1的PCR引物，试剂III-c 为基因SOCS-3的PCR引物，试剂III-d为基因β-actin的PCR引物。

上述各试剂的配比如下表1～表4所述。

表1：试剂盒的组成(注：本表所列试剂的量为10个样本反应)