[发明专利]与高尿酸血症密切相关的新的人URAT1基因SNP位点

说明书

技术领域：

本发明为与血液中尿酸水平密切相关的hURAT1基因第三内含子SNP位点+11 G>A，涉 及生物医学高技术中新基因的开发与应用领域。

发明背景：

尿酸是人体嘌呤代谢的终末产物，肾脏是尿酸排泄的主要途径。肾脏对尿酸的排泄主要 取决于肾小管腔和基底膜侧尿酸重吸收、分泌转运体的数目和活性。有关资料显示，肾小管 对尿酸的重吸收增加是人类高尿酸血症的主要原因，而hURAT1作为最重要的尿酸盐重吸收 转运体，被认为是调节血尿酸水平的关键蛋白。

hURAT1基因属于有机离子转运家族SLC22，该基因位于11q13，含有10个外显子和9 个内含子。hURAT1为阴离子交换通道，通过与乳酸等有机阴离子及氯等无机阴离子交换， 将肾小管管腔内的尿酸转运到肾小管上皮细胞内。

临床资料显示，hURAT1基因多态性与原发性高尿酸血症密切相关。Graessler J等研究发 现，hURAT1基因第二外显子C426T多态性与德国人群肾尿酸排泄减少和高尿酸血症显著相 关，相对于CC基因型，CT和TT基因型个体肾脏尿酸排泄分数(FEUA)明显降低，血尿 酸水平明显升高；Yukio Shima等研究发现，日本男性受试者中hURAT1第四内含子G/T多 态不同基因型者(GG，GT和TT)血尿酸水平明显不同，GG基因型者血尿酸水平最高，GT 基因型者次之，TT基因型者最低，提出在日本人群中，该SNP位点可作为独立的高尿酸血 症预测标记。Vázquez-Mellado等对69名墨西哥原发性痛风患者及其29名一级家属和120名 健康个体的hURAT1基因进行序列分析，结果显示69名痛风患者中16名患者存在hURAT1 基因突变，占患者的23％，其中5种突变位于第5外显子，1种突变位于第4外显子，16名 突变患者中有11名为第5外显子的C850G错义突变，提出上述突变可能与原发性痛风有关。

单核苷酸多态性是人类遗传变异的主要来源，众多研究证明单核苷酸多态性影响多基因 遗传病个体的易感性。高尿酸血症是一种多基因遗传病，hURAT1作为高尿酸血症的候选基 因，其单核苷酸多态性在导致高尿酸血症中发挥重要的作用。单核苷酸多态性在不同人群中 分布不同，在中国人群中没有高尿酸血症和hURAT1基因单核苷酸多态性的相关性报道。本 研究中，我们选择568名中国北方汉族人群hURAT1基因10个外显子和9个内含子进行测 序，以期发现中国北方汉族人群中与高尿酸血症相关的hURAT1基因单核苷酸多态性。

发明目的：

选择原发性高尿酸血症病人227例，对照组341例。取所有研究对象外周抗凝血，提取 基因组DNA。设计特异性引物，采用PCR方法分别扩增hURAT1基因启动子、10个外显子 及外显子和内含子交界处，进行正向和反向测序，应用Genestar软件寻找SNP及突变位点；应 用haploview软件检验研究对象SNP Hardy-Weinberg平衡，确认研究对象选取的随机性及两 两SNP位点之间的连锁关系；应用X²检验比较不同组别基因型及等位基因频率，确定与原 发性高尿酸血症相关的SNP及突变位点；应用Phase软件进行与原发性高尿酸血症相关的SNP 位点所组成的单倍型分析，确定原发性高尿酸血症易感单倍型；应用Logistic回归分析和不 同组别间生化指标的比较，确认原发性高尿酸血症的致病位点，从而为高尿酸血症的基因治疗 以及新药筛选等提供可能的理论指导和依据。

内容与要求：

研究对象中高尿酸血症组患者的收入标准：普通饮食并排除心、肝、肾以及全身性疾病 的基础上，连续三次测定男性及绝经后女性血清中尿酸含量超过416umol/L，绝经前女性超过 357umol/L。正常对照组收入标准：血脂、肾功能、肝功能、尿酸值(各项生化指标)均在 正常范围内的无高尿酸血症家族史正常人。利用常规方法提取患者外周血的基因组DNA，结 合PCR方法获得目的片段，纯化后测序，与正常人相比较，寻找SNP位点。

该基因/蛋白达到的技术指标为：

1、hURAT1基因中我们共发现了13个SNP位点，其中12个与已知报道相符，但我们发现的 第3内含子+11 G>A位点在国内、国际上均未见有相关报道，因此，该位点是hURAT1基 因的一个新的SNP位点(测序图见图1)。