[发明专利]一种三聚氰胺或三聚氰酸的测定方法及它的试剂盒或试纸条

权利要求书

1、一种三聚氰胺的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：

A、样品准备：

1)标准样品的制备

将1-3份三聚氰胺溶于3-9重量份含有10-40重量％无机强酸与10-40重量％硫酸氢钠的混合溶液中，然后，让该混合溶液在温度150-170℃下加热3-5小时，再将该溶液冷却到室温，然后进行离心分离得到上清液，往其中加入与所述无机强酸同等当量的无机强碱，中和在其溶液中存在的无机强酸，再将三聚氰胺浓度调整到200ppm，得到的溶液作为标准样品；

2)样品预处理

称取1-3重量份待测定样品，溶于3-9重量份含有10-40重量％无机强酸与10-40重量％硫酸氢钠的溶液中，然后，让该混合溶液在150-170℃下加热3-5小时，再将该溶液冷却到室温，然后进行离心得到上清液，往其中加入与所述无机强酸同等当量的无机强碱，中和在其溶液中存在的无机强酸，这样得到的上清液作为待测样品；

3)空白样品

含有10-40重量％无机强酸与10-40重量％硫酸氢钠的溶液在温度150-170℃下加热3-5小时，再将该溶液冷却到室温，然后进行离心得到的上清液，往其中加入与所述无机强酸同等当量的无机强碱，中和其溶液中存在的无机强酸，这样得到的上清液作为空白样品，其三聚氰胺浓度为0ppm；

B、三聚氰酸酶解：

在步骤A)得到的标准样品、待测样品、空白样品在下述条件下分别进行三聚氰酸的酶解反应：

B-1)该酶解反应介质含有：缓冲液80-700mmol/L、稳定剂0.01-7mol/L、三聚氰酸酰胺水解酶1000-80000U/L、双缩脲酰胺水解酶1000-80000U/L、脲基甲酸水解酶1000-80000U/L；

B-2)三聚氰酸依次在三聚氰酸酰胺水解酶、双缩脲酰胺水解酶与脲基甲酸水解酶的作用下进行酶催化反应，最后得到二氧化碳和氨；

B-3)反应温度36-38℃，反应时间8-12分钟；

C、二氧化碳与氨的定量测定：

首先，制备试剂：

试剂1的制备：分别移取或称取缓冲液、稳定剂、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶、NADH过氧化物酶、丙酮酸脱氢酶、丙酮酸氧化酶、还原型辅酶、α-酮戊二酸、乙酰辅酶A，然后将它们混合均匀，使用时用水将它们溶解得到一种溶液，它们的浓度分别是50-500mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000mmol/L、1000-80000U/L、100-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、0.2-0.3mmol/L、1-20mmol/L与0.5-20mmol/L；它们可以组成单剂试剂或双剂试剂；

试剂2的制备：分别移取或称取缓冲液、稳定剂、三聚氰酸酰胺水解酶、双缩脲酰胺水解酶和脲基甲酸水解酶，然后将它们混合均匀，使用时用水将它们溶解得到一种溶液，它们的浓度分别是80-700mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L；

然后，把待测样品、所述的试剂1和试剂2加到生化分析仪中使这些试剂浓度达到上述浓度，再在温度36-38℃下在主波长340nm与副波长405nm处分别进行检测8-12分钟；标准样品和空白样品进行同样的检测；

D、数据处理

由主波长340nm的吸光度变化，根据下式计算得到三聚氰胺含量：

ΔA(标准)-ΔA(空白)

式中：

ΔA(待测样品)表示待测样品的吸光度变化；

ΔA(空白)表示空白品的吸光度变化；

ΔA(标准)表示标准品的吸光度变化。