[发明专利]利用试管微扦插快速繁殖牛大力种苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体为一种利用试管茎段微扦插快速繁殖牛大力种苗的方法。

背景技术

牛大力属蝶形花科鸡血藤属，始载于《生草药性备要》，功能为补虚润肺，强筋活络。用于腰肌劳损，风湿性关节炎，治肺热，肺虚咳嗽，肺结核，慢性支气管炎，慢性肝炎，遗精，白带等。70年代开始作为壮腰健肾丸、强力健身胶囊等的原料而用于中成药的生产，在两广地区得到广泛应用；上世纪末本开始，广东、香港、澳门等地民间普遍使用牛大力熬制靓汤，用量已经远远超过制药企业，并有逐年增长之势。牛大力以根入药，一般在秋季挖取生长4～5年的牛大力的圆柱状或纺锤状块根供应市场。由于牛大力均来自野生资源，不断的滥采滥挖，使野生牛大力资源濒临灭绝。

牛大力传统的繁殖方法为种子繁殖，该方法存在的问题是：(1)种子资源紧缺，批量采集困难；(2)种子寿命短，不能低温储存，因此不能定期播种育苗；(3)种子发芽率低，仅达到45％左右；(4)种子苗根系以主根为主，块根形成数量少，产量低。

近几年来，扦插繁殖和组培繁殖成为牛大力种苗繁殖的研究重点。扦插繁殖现存的问题是：(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死亡；(2)插条资源紧缺，批量繁殖困难。组培繁殖目前采用愈伤组织诱导、愈伤组织分化增殖和不定芽生根的方式获得无菌苗，这种方式存在的问题是：(1)诱导愈伤组织过程时间较长；(2)愈伤组织分化为不定芽的频率较低，分化出的不定芽变异率提高；(3)愈伤组织分化出的不定芽伸长速度慢，达到生根标准的时间长。这些问题严重阻碍了牛大力种苗的规模化生产，因而无法满足市场对牛大力的需求。为此，必须建立能大量、快速扩繁牛大力种苗的生产技术体系。

牛大力属蝶形花科鸡血藤属，始载于《生草药性备要》，功能为补虚润肺，强筋活络。用于腰肌劳损，风湿性关节炎，治肺热，肺虚咳嗽，肺结核，慢性支气管炎，慢性肝炎，遗精，白带等。70年代开始作为壮腰健肾丸、强力健身胶囊等的原料而用于中成药的生产，在两广地区得到广泛应用；上世纪末本开始，广东、香港、澳门等地民间普遍使用牛大力熬制靓汤，用量已经远远超过制药企业，并有逐年增长之势。牛大力以根入药，一般在秋季挖取生长4～5年的牛大力的圆柱状或纺锤状块根供应市场。由于牛大力均来自野生资源，不断的滥采滥挖，使野生牛大力资源濒临灭绝。

牛大力传统的繁殖方法为种子繁殖，该方法存在的问题是：(1)种子资源紧缺，批量采集困难；(2)种子寿命短，不能低温储存，因此不能定期播种育苗；(3)种子发芽率低，仅达到45％左右；(4)种子苗根系以主根为主，块根形成数量少，产量低。

近几年来，扦插繁殖和组培繁殖成为牛大力种苗繁殖的研究重点。扦插繁殖现存的问题是：(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死亡；(2)插条资源紧缺，批量繁殖困难。组培繁殖目前采用愈伤组织诱导、愈伤组织分化增殖和不定芽生根的方式获得无菌苗，这种方式存在的问题是：(1)诱导愈伤组织过程时间较长；(2)愈伤组织分化为不定芽的频率较低，分化出的不定芽变异率提高；(3)愈伤组织分化出的不定芽伸长速度慢，达到生根标准的时间长。这些问题严重阻碍了牛大力种苗的规模化生产，因而无法满足市场对牛大力的需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用试管微扦插快速繁殖牛大力种苗的方法，是一种利用试管中茎段侧芽萌发和伸长速度快的特点，实现了牛大力种苗大规模扩繁的目的。

本发明利用少量种子获得无菌苗，以无菌苗茎段为外植体，通过试管微扦插促进侧芽不断萌发进行快速增殖，实现牛大力种苗大规模扩繁。

本发明所采用的技术方案：一种利用试管微扦插快速繁殖牛大力种苗的方法，包括无菌苗的获得过程、茎段微扦插过程、茎段生根过程。

1、无菌苗的获得过程

选取牛大力的荚果经消毒后将种子剥出，将种子接种到发芽培养基进行培养至长成幼苗，所述发芽培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤、α-萘乙酸。

2、茎段微扦插过程

将步骤1所获得的幼苗切成茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养至长出侧芽，再将侧芽切成茎段，然后将其基部向下插入新鲜的微扦插培养基中进行培养。所述微扦插培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤、吲哚乙酸。

3、茎段生根过程

将步骤2所获得的侧芽切成茎段，并将其接种到生根培养基上，先暗培养再进行光照培养，至茎段生根即可获得牛大力种苗。所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基并附加蛋白胨、IAA、IBA、生物素。