[发明专利]利用农杆菌提高大蒜的转化效率的方法及由其制备的大蒜

权利要求书

1.一种利用农杆菌提高大蒜植物体的转化效率的方法，其特征在于， 该方法包括以下阶段：

(1)在添加有0.5-2mg/L的2，4-二氯苯氧基乙酸和0.05-0.3mg/L的吲 哚基乙酸的MS培养基上培养7-9周，以诱导产生大蒜愈伤组织的阶段；

(2)将上述经过诱导产生的大蒜愈伤组织和具有重组植物表达载体的 根癌农杆菌在共同培养基上共同培养，以进行转化的阶段，所述共同培养基 为添加有0.5-2mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸和150-250mg/L的半胱氨酸的1/2 楚氏培养基，或者为添加有0.5-2mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸、150-250mg/L 的半胱氨酸以及50-150mg/L的二硫苏糖醇的1/2楚氏培养基；

(3)将上述经过共同培养的大蒜细胞接种到添加有抗生素的选择性培 养基上培养11-13周，以进行筛选的阶段；以及

(4)将上述经过筛选的大蒜细胞接种到再分化培养基上，以进行再分 化的阶段，在所述再分化培养基中添加有4-6mg/L的激动素和0.5-2mg/L的 萘乙酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述第(1)阶段中，所述 MS培养基中添加有1mg/L的2，4-二氯苯氧基乙酸和0.2mg/L的吲哚基乙酸。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述第(2)阶段中，所述共 同培养的时间为5-7天。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述第(2)阶段中，所述共 同培养基为添加有1mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸和200mg/L的半胱氨酸的1/2 楚氏培养基，或者为添加有1mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸、200mg/L的半胱 氨酸以及100mg/L的二硫苏糖醇的1/2楚氏培养基。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，在所述第(2)阶段中，所述共 同培养基为添加有1mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸和200mg/L的半胱氨酸的1/2 楚氏培养基。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述第(3)阶段中，在所述 添加有抗生素的选择性培养基上培养12周。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述第(4)阶段中，在所述 再分化培养基中添加有5mg/L的激动素和1mg/L的萘乙酸。