[发明专利]一种纳米壳聚糖衍生物,其制备方法和用途

权利要求书

1.一种纳米壳聚糖衍生物，其特征在于颗粒大小为1-300nm，以 及固载基质为壳聚糖，其中该衍生物带有活性环氧基团，带有活性羧 基官能团，以及进一步与过渡金属离子络合。

2.权利要求1的纳米壳聚糖衍生物，其中颗粒大小为20-100nm。

3.权利要求1的纳米壳聚糖衍生物，其中活性环氧基团选自取代 或未取代的丙烯酸环氧丙酯或取代或未取代的丙炔酸环氧丙酯，其中 取代基为C₁～C₁₀直链或支链烷基，C₁～C₁₀直链或支链烷氧基，C₁～ C₁₀直链或支链烯基，C₁～C₁₀直链或支链炔基，或卤素。

4.权利要求3的纳米壳聚糖衍生物，其中活性环氧基团选自甲基 丙烯酸环氧丙酯或丙烯酸环氧丙酯。

5.权利要求1的纳米壳聚糖衍生物，其中活性羧基官能团选自亚 胺基二乙酸或氨基三乙酸或乙二胺三乙酸。

6.权利要求1的纳米壳聚糖衍生物，其中过渡金属离子选自Fe³⁺， Ti⁴⁺，Ni²⁺，Zr⁴⁺或Ga³⁺。

7.权利要求1-6任一项的纳米壳聚糖衍生物的制备方法，包括下 列步骤：(1)将壳聚糖溶于0.1％-20wt％稀酸水溶液，与甲基丙烯酸 环氧丙酯或丙烯酸环氧丙酯混合，进行自聚反应和接枝反应，得到带 有活性环氧基团的壳聚糖衍生物，(2)接着与亚胺基二乙酸钠或氨基 三乙酸或乙二胺三乙酸进行开环加成反应，得到带有羧基活性官能团 的壳聚糖衍生物，(3)再与选自Fe³⁺，Ti⁴⁺，Zr⁴⁺，Ni²⁺或Ga³⁺的过渡 金属离子发生螯合作用，制得所述纳米壳聚糖衍生物，其中自聚和接 枝的反应温度为40-100℃，开环反应温度为50-80℃。

8.权利要求7的制备方法，其特征在于自聚和接枝的反应加入选 自偶氮二异丁腈，正丁基锂，过硫酸钾，硝酸铈铵，硫代碳酸-溴酸钾， 二高碘酸铜酸钾，或过硫酸氨和硫代硫酸钠的引发剂。

9.权利要求8的制备方法，其中引发剂加入量为反应单体重量的 1-5％。

10.权利要求7的制备方法，其特征在于与亚胺基二乙酸钠或氨 基三乙酸或乙二胺三乙酸发生开环加成反应时，pH值为8-12。

11.权利要求7的制备方法，其特征在于与过渡金属离子发生螯 合作用时，Fe³⁺的浓度为10mM-100mM。

12.一种利用权利要求1-6任一项的纳米壳聚糖衍生物富集和纯 化磷酸化多肽的方法，包括将含有磷酸化多肽的混合物溶于上样液中， 其中所述上样液为含有2，5-二羟基苯甲酸的乙腈和三氟乙酸的水溶液， 再加入所述纳米壳聚糖衍生物进行富集，洗涤后得到选择性吸附有磷 酸化多肽的纳米壳聚糖衍生物，并以高的pH溶液洗脱负载的磷酸化多 肽，任选以氨水洗脱负载的磷酸化多肽。

13.权利要求12的富集和纯化磷酸化多肽的方法，其特征是选择 适当的条件，用质谱技术直接测定和鉴定分析物。

14.权利要求12的富集和纯化磷酸化多肽的方法，其特征是将上 述纳米壳聚糖衍生物涂在芯片上进行微量的磷酸化多肽的富集和纯化。

15.权利要求12的富集和纯化磷酸化多肽的方法，其特征是将上 述纳米壳聚糖衍生物填充入色谱柱中进行大规模的磷酸化多肽的富集 和纯化。