[发明专利]稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞分化细胞无效
| 申请号： | 200810182602.8 | 申请日： | 2008-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN101748099A | 公开（公告）日： | 2010-06-23 |
| 发明（设计）人： | 赵宏喜;姚元庆;李凌松;王莉 | 申请（专利权）人： | 赵宏喜;姚元庆;李凌松;王莉 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/12;C12N15/867;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京瑞盟知识产权代理有限公司 11300 | 代理人： | 王友彭;王琳 |
| 地址： | 710038 陕西省西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 hla 分子 胚胎 干细胞 分化 细胞 | ||
1.一种稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞分化细胞，其特征在于由下述方法得到：
一、构建HLA-G的慢病毒真核表达载体，步骤如下：
1)获取胎盘组织cDNA；
2)设计引物，PCR扩增获得HLA-G序列并回收；
3)将其连接T-easy质粒，酶切、测序鉴定；
4)将HLA-G与慢病毒载体质粒连接；
5)在293T细胞中包装慢病毒；
二、建立稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞并检测其全能性；
三、诱导稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞随机及定向分化细胞，检测这些分化细胞HLA-G分子的表达。
2.根据权利要求1所述的稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞分化细胞，其特征在于：第2)步中，所述引物序列是：上游引物序列如SEQ ID No.1所述，下游引物序列如SEQ ID No.2所述。
3.根据权利要求1所述的稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞分化细胞，其特征在于：第3)步中，所述酶切用的酶是：上游XbaI内切酶，下游BsrGI内切酶。
4.根据权利要求1所述的稳定表达HLA-G分子的人胚胎干细胞分化细胞，其特征在于：第二步中，慢病毒转染人胚胎干细胞建立稳定表达HLA-G分子的过程是：
(1)胶原酶IV消化人胚胎干细胞；
(2)PBS洗2遍；
(3)加入2ml培养液将人胚胎干细胞重悬；
(4)同时加入60ul病毒液及8ul Polybrene；
(5)2小时后离心，PBS洗2遍，去除病毒；
(6)将人胚胎干细胞重新种植于饲养层细胞上，72小时后加入50ug/ml潮霉素B筛选，获得稳定表达HLA-G的人胚胎干细胞。
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