[发明专利]无溶剂的提取方法

说明书

此案是申请日为2001年01月19日、中国申请号为01806424.8、发明名称为“无溶剂的提取方法”的发明申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及不使用任何显著量的非极性有机溶剂从微生物中提取脂质的方法。

发明背景

一种典型的微生物脂质制备方法，例如制备ω-3高度不饱和脂肪酸，尤其是富含二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)的脂质混合物，涉及培养能在发酵罐，池(pond)或生物反应器中产生所需脂质的微生物，分离微生物生物量，将其干燥并利用非极性有机溶剂例如己烷提取胞内脂质。通常，在破裂(即裂解)干燥的微生物细胞后提取微生物胞内脂质。提取的脂质可进一步精制以产生高纯度和/或质量的脂质。通常按照以下所述分离微生物，首先用水稀释发酵液(fermentation broth)，并离心混合物以分离微生物。然后干燥细胞，如果此后不能立即或很快地提取脂质，将细胞储存在例如真空密封的袋中以防止脂质的降解。

不辛的是，干燥方法要使微生物受热，如果操作不正确可损害脂质即降低其质量。真空密封的袋可能会产生漏洞使微生物暴露于空气中，因此会进一步降低脂质的质量。此外，如果不用抗氧化剂处理干燥过的微生物，由于暴露于空气和或光中使得脂质进一步降解。例如，类胡萝卜素，叶黄素和长链脂肪酸如DHA由于空气和/或光的氧化作用可能会降解。此外，一些情况下，接触干燥微生物的操作者会产生变态反应而威胁操作者的安全和健康。

此外，在工业规模的生产中，脂质提取中用到的大量挥发性和易燃性非极性有机溶剂会形成危险的工作环境。提取方法中如果使用非极性有机溶剂则必须要用防爆的油回收系统，因此增加了脂质回收的成本。而且， 使用非极性有机溶剂从微生物中提取脂质会产生非极性有机溶剂废物液，这需要合适的处理方法，进一步增加了脂质提取的总生产成本。

因此，存在一种不需要使用非极性有机溶剂从微生物中提取脂质的方法的需求。还存在一种提取前不需要昂贵的干燥微生物步骤从微生物中提取脂质的方法的需求。

发明概述

本发明一个实施方案提供从微生物中获得脂质的方法，包括：

(a)裂解微生物细胞以产生裂解细胞混合物；

(b)处理裂解细胞的混合物以产生相分离的混合物，包含重层(heavylayer)和富含脂质的轻层(light layer)；

(c)使重层与富含脂质的轻层分离；和

(d)从轻层中获得脂质和/或脂质组分。

本发明另一实施方案提供从微生物中获得脂质的方法，包括：

(a)在培养基中培养微生物；

(b)处理所述培养基和微生物细胞以释放胞内脂质；

(c)将包含已释放胞内脂质的培养基进行重力分离以形成含脂质的轻相和重相；

(d)使所述轻相和所述重相分离；

(e)处理所述轻相以破坏在该脂质和水间形成的乳状液；和

(f)回收粗脂质。

本发明的另一实施方案，提供从微生物中获得脂质的方法，包括下述步骤：

(a)在培养基中培养所述微生物；

(b)处理来自所述培养基的微生物细胞并没有干燥所述细胞以释放胞内脂质；

(c)将包含已释放胞内脂质的培养基进行重力分离以形成含脂质的轻相和重相；

(d)使所述轻相与所述重相分离；

(e)处理所述轻相以破坏在该脂质和水间形成的乳状液；和

(f)回收粗脂质。