[发明专利]阿佛曼链霉菌种的重离子辐照诱变及辐照菌种的培养方法

权利要求书

1.阿佛曼链霉菌种的重离子辐照诱变及辐照菌种的培养方法，其特征为

(1)阿佛曼链霉素菌种孢子悬液用¹²C⁺⁶重离子束辐照进行诱变，辐照剂量范围为40-70Gy；

(2)将辐照诱变后的孢子悬液和出发菌种的孢子悬液分别进行梯度稀释，用生理盐水稀释至10^-4-10^-5；

(3)将稀释的悬液准确转到分离平板培养基上，涂抹均匀，分离单个菌落，测定最佳正突变率最佳诱变剂量；

(4)对突变明显的菌落，用接种环取菌落孢子接种在斜面培养基上；

(5)将(3)的平板培养基与(4)的斜面培养基包扎后置于28℃恒温箱中培养6天，再置于2-4℃冰箱中等待菌种接种；

(6)对比辐照诱变菌种与出发菌种的平板培养结果和斜面培养结果，得出最佳正突变率、最佳诱变剂量，测出致死率、观察菌落形态，得到正突变的菌株。

2.根据权利要求1所述的阿佛曼链霉菌种的重离子辐照诱变及辐照菌种的培养方法，其特征为¹²C⁺⁶重离子束辐照进行诱变的剂量为50Gy。

3.根据权利要求1或2所述的阿佛曼链霉菌种的重离子辐照诱变及辐照菌种的培养方法，其特征为斜面培养基及分离平板培养基配方：可溶性淀粉7g、葡萄糖5g、氯化钠0.5g、硫酸铵2g、硫酸镁1g、磷酸氢二钾3g、轻质碳酸钙3g、琼脂粉20g，加水定容至1000ml。

4.根据权利要求3所述的阿佛曼链霉菌种的重离子辐照诱变及辐照菌种的培养方法，其特征为斜面培养基及分离平板培养基的制备方法如下：

(1)准确称量可溶性淀粉、葡萄糖、氯化钠、硫酸铵、硫酸镁、磷酸氢二钾依次加入烧杯中，搅拌均匀后调节PH值至7.50；

(2)加入琼脂粉搅拌均匀，加热煮沸，待琼脂充分溶解，加入轻质碳酸钙搅拌均匀，加水定溶至1000ml，再煮沸，趁热分别分装在试管中和三角瓶中；

(3)加棉塞包扎试管和三角瓶后，进行120-123℃，20分钟的高压灭菌；

(4)斜面培养基的制备灭菌结束后，待培养基温度降至50-60℃培养基在试管中制备成斜面，待琼脂凝固后，置37℃的恒温箱中空培6-7天，置入2-4℃冰箱保存等待菌种接种；

分离平板培养基的制备待三角瓶中的分离培养基温度降至50-60℃时，趁热在平皿上制备平板培养基，待琼脂凝固后包扎，置37℃的恒温箱中空培6-7天，置入2-4℃冰箱保存，等待菌种接种。