[发明专利]用于寡核苷酸微阵列的定量方法

权利要求书

1.用于分析靶核酸的定量方法，其包括：

将一种或多种荧光标记的靶扩增子退火至两种或多种靶核酸探针；

将一种或多种荧光标记的内部对照扩增子退火至一种或多种内部核酸对照 探针；

激活来自杂交至两种或多种靶核酸探针的一种或多种荧光标记的靶扩增子 的第一荧光应答；

激活来自杂交至一种或多种内部核酸对照探针的一种或多种荧光标记的内 部对照扩增子的第二荧光应答；

检测第一和第二荧光应答，用于定量分析一种或多种靶核酸和一种或多种 内部核酸对照，

其中两种或多种靶核酸探针和一种或多种内部核酸对照探针非常接近基质 的上表面，以及其中通过应用预先确定波长的衰逝波激活第一和第二荧光应答。

2.权利要求1的定量方法，其中退火发生在聚合酶链式反应期间。

3.权利要求2的定量方法，其中第一和第二荧光应答的检测发生在聚合 酶链式反应的退火步骤或延伸步骤期间。

4.权利要求1的定量方法，其中应用微阵列印刷机将两种或多种靶核酸 探针和一种或多种内部核酸对照探针印在并固定在基质的表面。

5.权利要求4的定量方法，其中用选自硅烷、抗生物素蛋白、聚-L-赖氨 酸、抗生蛋白链菌素、多糖、硫醇或其组合的试剂化学修饰基质。

6.权利要求1的定量方法，其中聚合酶链式反应是实时聚合酶链式反应。

7.权利要求1的定量方法，其中一种或多种内部核酸对照是线性双链脱 氧核糖核酸、环状双链脱氧核糖核酸或其组合。

8.权利要求1的定量方法，其中一种或多种内部核酸对照具有与两个或 多个靶核酸相同的引物结合区域。

9.权利要求1的定量方法，其中退火至一种或多种内部核酸对照探针的 荧光标记的扩增子的序列长度是退火至两种或多种靶核酸的荧光标记的扩增子 序列长度的约百分之五百以下。

10.权利要求1的定量方法，其中一种或多种内部核酸对照序列具有约百 分之五以下的交叉反应。

11.权利要求1的定量方法，其中如果存在两种或多种内部核酸对照，两 种或多种内部核酸对照以不同的浓度存在。

12.权利要求1的定量方法，其中如果存在两种或多种内部核酸对照探针， 两种或多种内部核酸对照探针以与两种或多种靶核酸探针相同的浓度存在。

13.权利要求1的定量方法，其中一种或多种内部核酸对照具有约百分之 五以下的与两种或多种靶核酸的交叉反应。

14.权利要求1的定量方法，其中在达到杂交平顶之前检测第一和第二荧 光应答。

15.权利要求1的定量方法，其中两种或多种靶核酸衍生自一种或多种病 原体，其中一种或多种病原体是病毒、细菌、古细菌、真菌、原生动物、支原 体、朊病毒、寄生生物或其组合。

16.权利要求15的定量方法，其中一种或多种病原体是立克次氏体 (Rickellsia)、衣原体(Chlamydia)、枝原体(Mycoplasma)、螺旋体(Spirochete)、链 球菌(Streptococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)、单核细胞增多性李司忒菌(L. monocytogenes)、脑膜炎奈瑟氏菌(N.meningitides)、大肠杆菌(E.coli)、流感嗜血 杆菌(H.influenzae)、伯氏疏螺旋体(B.burgdorferi)、钩端螺旋体(Leptospira)、变 形杆菌(Proteus)、厌氧杆菌(Anaerobacter)、沙门氏菌(Salmonella)、结核分支杆 菌(M.tuberculosis)、肠球菌(Enterococcus)、脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)、肠病 毒(Enterovirus)、柯萨基病毒(Coxsackievirus)、HSV-1、HSV-2或其组合。