[发明专利]一种氟乙酰胺类毒药的免疫层析检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

一种氟乙酰胺类毒药的免疫层析检测试纸条及其制备方法，属于免疫检测技术领域，具体涉及到免疫胶体金试剂的制备及试纸条的制备。

背景技术

氟乙酰胺、氟乙酸钠、氟乙酸均属于氟乙酰胺类剧毒药，其毒性、中毒症状同毒鼠强相近。氟乙酰胺类毒药已成为我国刑事案件中最常见的毒物之一。氟乙酰胺进入生物体后，很快在体内代谢产生氟乙酸根阴离子，所以检验工作最终归结到对生物检材中痕量氟乙酸根阴离子的分析。现有的能实现多中毒检测的方法主要是仪器分析，其中包括有离子色谱法、毛细管电泳法及衍生化后GC-NPD、GC-ECD、GC-MS法。但这些检测方法需要昂贵的仪器设备，操作需要专业技术人员，且不能适应高通量，现场的快速检测。因此实现具有快速，便携优点的免疫检测方法的中毒检测具有现实意义。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有检测技术的缺陷，提供一种便携，快速适合进行现场检测的免疫层析色谱检测法(gold immunochromatography assay，GICA)，实现氟乙酰胺类毒药的中毒检测。同时提供该检测试纸条的制备方法。

本发明的技术方案：一种氟乙酰胺类毒药的免疫层析检测试纸条，由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬组成，PVC背衬上依次粘贴样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，金标垫上包被了抗氟乙酰胺类毒药的簇特异性抗体-胶体金标记物，硝酸纤维素膜上依次包被了氟乙酸钠-OVA和羊抗兔IgG。

所述的氟乙酰胺类毒药的免疫层析检测试纸条的制备方法，制备步骤为：

(1)制备氟乙酸钠-OVA偶联物：将氟乙酸钠与OVA以50∶1摩尔比溶于pH8、0.01mol/L的PBS缓冲溶液中、搅拌下加入碳二亚胺EDC交联剂，EDC摩尔用量为氟乙酸钠摩尔量的1/10，反应3h，4℃透析3天，形成氟乙酸钠-OVA偶联物；

(2)制备抗氟乙酸钠的多克隆抗体：用EDC法制备氟乙酸钠-BSA偶联物，用氟乙酸钠-BSA偶联物免疫得到抗氟乙酸钠的多克隆抗体；

(3)制备胶体金：用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm胶体金颗粒；

(4)制备抗氟乙酰胺类毒药的簇特异性抗体-胶体金标记物：将3mL胶体金调至pH 9，搅拌下逐滴加入蛋白浓度为0.075mg/mL的抗氟乙酸钠的多克隆抗体0.2mL，放置30min后加入牛血清蛋白BSA使终浓度为1％，放置至少30min后，10000转60min离心并用pH 9.0、0.002mol/L的硼酸盐缓冲液3mL重悬两次，最后用0.3mL重悬液重悬，得到稳定的抗氟乙酸钠抗体-胶体金标记物；

(5)将抗氟乙酸钠抗体-胶体金标记物包被在金标垫上，将氟乙酸钠-OVA偶联物和羊抗兔IgG分别包被在作为反应点的硝酸纤维素膜的测试线和质控线，在37℃烘箱充分干燥；

(6)试纸条的组装：将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫由一端依次黏附在PVC背衬上，用切条机切割成3mm宽的细条，即得到用于检测的免疫层析检测试纸条。

本发明的有益效果：快速，仅需要5-10分钟；便携，适合现场检测；操作简便，不需要专业技术人员。

附图说明

图1组装完成的免疫层析检测试纸条结构示意图。

具体实施方式

实施例1

PVC背衬一端依次粘贴样品垫、金标垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫，金标垫上包被了抗氟乙酰胺类毒药的簇特异性抗体-胶体金标记物，硝酸纤维素膜上包被了氟乙酸钠-OVA和羊抗兔IgG。

按以下步骤制备：

(1)制备氟乙酸钠-OVA偶联物：将氟乙酸钠与OVA以50∶1摩尔比溶于PBS(0.01mol/L pH8)，搅拌下加入EDC交联剂，反应3h，4℃透析3天，形成氟乙酸钠-OVA偶联物；

(2)制备抗氟乙酸钠的多克隆抗体：用上述EDC方法制备氟乙酸钠-BSA偶联物，用此偶联物免疫得到高纯度的抗氟乙酸钠的多克隆抗体；

(3)制备胶体金：用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm胶体金颗粒；