[发明专利]一种测定氨基酸微量元素螯合物螯合率的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及甘氨酸铜、锌、铁等氨基酸微量元素螯合物的螯合率的检测领 域，具体为一种测定氨基酸微量元素螯合物螯合率的检测方法。

背景技术

氨基酸微量元素螯合物符合人体微量元素吸收的机制和特点，把人体必需 的氨基酸和微量元素有机地结合起来，成为一种新型高效的微量元素营养强化 剂，具有良好的理化性质和生物活性。甘氨酸是分子量最小的氨基酸，其与微 量元素反应生成的螯合物也是分子量最小的氨基酸微量元素螯合物，能更好的 被肌体吸收、利用。

氨基酸微量元素螯合物是由1个或多个氨基酸基团与金属离子发生配合反 应形成的具有环状结构的化合物。它具有稳定性好、吸收率高、生物效价高、 毒性小等优点，目前已经广泛地用于畜牧生产中。氨基酸微量元素螯合物螯合率 的高低是反映氨基酸微量元素螯合物品质的一个重要指标，目前对氨基酸微量 元素螯合物螯合率的测定方法主要有凝胶过滤色谱法和滴定法。

凝胶过滤色谱法可以按分子大小将不同形态微量元素分开，为研究氨基酸 微量元素螯合物的存在状态提供了一种重要的检测手段(Brown和Zeringue， Laboratory evaluations of solubility and structural integrity of complexd and chelated trace miner al supplements，，1994；Matsui等，Supplementation of zinc as amino acid-chelated zinc for piglets，1996)。Cao(1998，2000)利用凝胶色谱柱检测 缓冲液中游离态和络合态锌，结果表明在pH值为2和5的缓冲液中，有机锌 产品的洗脱峰与硫酸锌中锌离子的洗脱峰相同，而对于有机锌产品的中性水溶 液，在离子态锌的洗脱峰之前还出现一个较小的洗脱峰，说明此条件下小部分 锌为络合态。林萍(2004)用Sephadex G-10凝胶色谱对合成的甘氨酸螯合铁 的组成进行了初步分析结果发现：游离的氨基酸用硼酸洗脱液洗脱7min就出 峰，而甘氨酸螯合铁样品用硼酸洗脱液洗脱60min仍无吸收峰，由此说明，在 甘氨酸螯合铁中没有游离的甘氨酸存在，螯合铁在溶液中可能是以阴离子的形 式存在，和葡聚糖凝胶之间存在静电作用。由于甘氨酸螯合铁和游离的无机铁 在凝胶色谱中都不能直接洗出，因此不能用凝胶色谱方法分离。管海跃(2007) 采用凝胶色谱测定甘氨酸铁和甘氨酸锌的螯合率，但过程相当麻烦。因此，凝 胶色谱法测定螯合率过程麻烦，在基层推广有一定的困难。

根据氨基酸微量元素螯合物在乙醇等有机物中的溶解度极小，而微量的游 离金属离子和氨基酸都能溶于有机溶剂的特性，利用二者在有机溶剂中的溶解 度差异，采用有机溶剂处理的办法来纯化微量元素氨基酸螯合物样品，然后采用 滴定法可以测定氨基酸微量元素螯合物的螯合率。易凯等(2007)采用此方法 测定了蛋氨酸锌、蛋氨酸铜、蛋氨酸铁、甘氨酸铜、甘氨酸铁等的螯合率。但 是，对于含有难溶于乙醇的阴离子的氨基酸微量元素螯合物样品，滴定法不能 用于测定螯合率，故滴定法也存在一定的缺陷。

目前，市场上所销售的氨基酸微量元素螯合物产品比较多，因为检测螯合 率的方法不健全，所以大多数都是测定氨基酸微量元素螯合物产品中金属的总 含量，未考虑金属离子是结合还是游离状态，市场情况比较混乱，许多产品做 为氨基酸微量元素螯合物销售，但其实质只不过是微量元素和氨基酸的混合物。 为了推动氨基酸微量元素螯合物产品质量检验的深入研究，建立氨基酸微量元 素产品的相关标准，用以规范饲用氨基酸微量元素螯合物产品的生产、销售和 使用是当前非常有必要的。

发明内容

本发明的目的是针对现有氨基酸微量元素螯合物螯合率检测方法的不足，提 供一种测定氨基酸微量元素螯合物螯合率的检测方法，使检测过程不需纯化， 操作简便、易于基层推广、节约了工业生产成本。

本发明是这样实现的：一种测定氨基酸微量元素螯合物螯合率的检测方法， 测定步骤如下：取待测相应的氨基酸微量元素螯合物配成溶液，测其紫外—可 见吸收光谱图；取氨基酸微量元素螯合物中相应的金属离子的金属化合物配成 溶液，测其紫外—可见吸收光谱图，在紫外—可见吸收光谱图上找目标波长λ； 取上述氨基酸微量元素螯合物溶液稀释后在目标波长λ下测定该氨基酸微量元 素螯合物的标准曲线；称取待测氨基酸微量元素螯合物样品配制成溶液，在目 标波长λ下测定吸光度，然后通过计算出相应的浓度从而求出螯合率。