[发明专利]去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法

权利要求书

1.一种去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法，其特征在于包括如 下步骤：

①.原种处理和生产：采集甘蔗品种主茎，砍成双芽段，选取若干有效芽段，经 49.5～50.5℃水浴处理2～3h，然后在35℃～38℃光照培养箱中催芽3d～ 5d，催芽后育苗于35℃以下的温室中，待蔗苗长成2～4片叶时，定植于网 室苗圃中，待甘蔗生长至12或13个芽，用经75％酒清浸泡消毒的蔗刀砍取 整条蔗茎，并取汁用斑点酶标免疫试验法(DB-EIA)检测RSD病菌；

②.外植体选取与灭菌：取步骤①中经DB-EIA检测结果呈阴性且生长健壮的蔗 茎顶芽进行灭菌处理，作组织培养外植体；

③.外植体诱导培养：将步骤②灭菌处理后的蔗茎顶芽在无菌条件下，切取其3～ 5mm的茎尖组织接种于诱导培养基上，诱导产生丛芽；

④.继代增殖培养：将步骤③诱导分化的丛芽切成单株接种于增殖培养基上，进 行继代增殖培养，在27～28℃散射光下培养，15～20d继代一次，继代数不 超过10代；

⑤.促根培养：将步骤④长至5～6cm高的小苗转接于生根培养基上，进行生根培 养；

⑥.假植：当步骤⑤生根小苗生长至6～8cm高，根系发育健壮后，将生根瓶苗 移到自然光下炼苗2～3d，取出洗去苗上的培养基，种植于苗圃上，按常规 管理，苗高35～45cm且生长健壮的假植苗可移栽于大田进行扩繁；

⑦.苗圃扩繁：将步骤⑥中的假植苗定植于大田建立一级健康种苗圃，再通过二 级或三级苗圃扩繁，在从上级苗圃采苗进入下级苗圃扩繁时，采苗工具需用 75％的酒精浸泡消毒5min以上，方可用于采苗，以防交叉感染；

⑧.种苗RSD检测：将步骤⑦扩繁的种苗，在种苗出圃用于大田生产用种前，抽 样取蔗茎汁用DB-EIA检测RSD病菌，当蔗茎感染率为0时，种苗合格，可 供大田生产种植。