[发明专利]去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及甘蔗种苗的繁殖生产，尤其是关于去除甘蔗宿根矮化病菌的技术

背景技术

甘蔗(Saccharum.spp)是我国主要的糖料作物及具有良好发展前景的生物质 能作物。甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease，简称RSD)是一种世界性的 重要甘蔗病害，也是我国蔗区的一种主要甘蔗病害，对甘蔗产量影响较大，一般新 植蔗产量损失10％～15％，宿根蔗产量损失20％～25％，且影响宿根蔗年限，是甘蔗 品种退化的重要原因之一。甘蔗RSD病原细菌寄居于蔗茎维管束中，尚无有效的化 学防治方法；同时由于缺乏抗源材料，甘蔗RSD抗病育种成效不大，至今未育成抗 性较好的生产品种，其较有效的控制措施是种植健康种苗。

培育甘蔗健康种苗的主要目的是去除以甘蔗RSD为主的种苗传播病害。早期比较 传统的去除甘蔗RSD病菌的方法是50℃热水浸种2-3h或54-58℃热空气处理蔗种 8h，可在一定程度上杀死感病蔗茎中的RSD病原菌，大大减轻RSD的发生程度，但 上述热处理方法具有不能彻底去除RSD病菌、易伤害蔗芽、水温难控制、去菌效果 不稳定及种苗繁殖系数低等不足之处，不适合我国蔗区生产实际，难以在生产上大 面积推广应用。近年也有利用热处理结合茎尖分生组织(1mm以下)培养去除甘蔗 RSD病菌的报道，但该种方法切取的外植体特别细小，需要在解剖镜下切取，操作 难度较大，且由于外植体特别细小，导致培养过程中酚污染率极高，诱导成苗率极 低，生产成本较高，难以在生产上推广应用。因此，生产上迫切需要一种能高效去 除RSD病菌、繁种速度快，同时生产成本低、操作容易的甘蔗健康种苗生产方法， 来满足我国甘蔗健康种苗生产的实际需要。

发明内容

本发明的目的是提出一种去除甘蔗宿根矮化病菌和快速繁殖甘蔗健康种苗的 方法，其具有去菌彻底、能规模化、快速、经济的地繁殖甘蔗健康种苗的效果。

本发明的技术方案如下：

一种去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法，包括如下步骤：

1.原种处理和生产：采集甘蔗品种主茎，砍成双芽段，选取若干有效芽段，经 49.5—50.5℃水浴处理2～3h，放在35℃～38℃光照培养箱中催芽3d～5d， 催芽后育苗于35℃以下温室中，待蔗苗长成2～4片叶时，定植于网室苗圃 中，待甘蔗生长至10个芽左右，用经75％酒清浸泡消毒的蔗刀砍取整条蔗茎， 并取汁采用斑点酶标免疫试验法(Dot b1ot enzyme immunoassays，简称 DB-EIA)检测RSD病菌；

2.外植体选取与灭菌：取步骤1)中经DB-EIA检测结果呈阴性且生长健壮的 蔗茎的顶芽，经灭菌处理，作组织培养外植体；

3.外植体诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的顶芽在无菌条件下，切取其3～ 5mm的茎尖组织接种于诱导培养基上，诱导产生丛芽；

4.继代增殖培养：将步骤3)诱导分化的丛芽切成单株接种于增殖培养其上， 进行继代增殖培养，在27～28℃散射光下培养，15～20d继代一次，继代数 以不超过10代为宜；

5.促根培养：将步骤4)长至5～6cm高的小苗转接于生根培养基上，进行生根 培养；

6.假植：当步骤5)生根小苗生长至6～8cm高，根系发育健壮后，将生根瓶 苗移到自然光下炼苗2～3d，取出洗去苗上的培养基，种植于苗圃(塘泥、 泥碳土和河沙混合的基质)上，按常规管理，苗高35～45cm且生长健壮的假 植苗可移栽于大田进行扩繁；

7.苗圃扩繁：将步骤6)假植苗定植于大田建立一级健康种苗圃，再通过二级 或三级苗圃扩繁，在从上级苗圃采苗进入下级苗圃扩繁时，采苗工具需用75％ 的酒精浸泡消毒5min以上，方可用于采苗，以防交叉感染；

8.种苗RSD检测：将步骤7)扩繁的种苗，在种苗出圃用于大田生产用种前， 抽样取蔗茎汁用DB-EIA检测RSD病菌，当蔗茎感染率为0时，种苗合格，可 供大田生产种植。

与现有技术对比，本发明有如下突出特点和显著进步：

一、以高效彻底去除甘蔗种苗RSD病菌，确保种苗质量

本发明采用两次去除RSD病菌的方法(热水处理及茎尖培养)，确保种苗RSD 病菌去除率100％。

二、以快速大量繁殖甘蔗健康种苗，其种苗无变异