[发明专利]一种从发酵液中提取灵芝多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属药用和保健用多糖制备技术领域，具体地，涉及一种从发酵液中提取灵芝多糖的方法。

背景技术

近年来，药理学和免疫学的多方研究表明，灵芝主要药用有效成分是灵芝多糖，灵芝多糖具有广泛的药理活性，排毒、抗放射，提高肝脏、骨髓合成DNA、RNA的能力，抗肿瘤增强机体免疫等效果。因此多糖的提取为广大科研人员和药研制者所重视，他们不断研究和探索灵芝多糖提取的方法，为弄清灵芝多糖的化学成分提供有力的理论依据，同时为许多疾病患者带来福音。

灵芝多糖是由葡萄糖、甘露糖、果糖等单糖连接成的一种生物大分子，其生理生化功能与其结构、特别是空间关系十分密切。研究表明：①多糖的相对分子质量在3×10⁵以上；②多聚物均具有β-1，3-D-残基的主链和β-1，6-D-葡萄糖侧链残基，不同来源的多糖，β-1，6-D-葡萄糖的分支程度不等，主链残基与侧链残基的比例为5∶2，即每个主链残基围绕2个β-1，6-D-葡萄糖残基，无β-1，6-侧链的β-1，3-葡聚糖未见抗肿瘤活性；③多糖的三维螺旋结构参与抗肿瘤活性，此结构遭破坏则影响其活性。

灵芝多糖存在于从灵芝子实体、菌丝体和发酵液中。从子实体和菌丝体中提取灵芝多糖已有许多报道，如公开号为CN1786033A(发明名称：灵芝多糖的制备方法)公开了一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，该法将灵芝子实体经过前处理、微滤、冷冻分离、膜分离、膜浓缩、减压浓缩、减压干燥，得到灵芝粗多糖产品为纯天然成份，高营养，疗效好，所采用工艺环保、高效、节能。

公开号为CN1307314(发明名称：酶解制备灵芝多糖的方法)巧妙地利用菌 丝体自身酶系统和外加的混合酶系统在适宜的条件下对灵芝真菌发酵液进行酶解，酶解后得到的灵芝粗多糖中灵芝多糖的含量可达35-60％，灵芝多糖分子量在6000-50000之间的活性灵芝多糖占70-90％。

然而由于子实体和菌丝体中灵芝多糖含量少，直接导致了灵芝多糖产量低，产物中灵芝多糖的含量低。

另外，从子实体和菌丝体中，提取灵芝多糖的方法还有将灵芝子实体或菌丝体粉碎，用水或碱浸提，乙醇沉淀，而后烘干。这种方法产率较高，但条件激烈，多糖活性结构遭到破坏，丧失或部分尚失生物活性，而且遭受细胞结构多糖的污染。产品色泽较深，溶解度低，不具备药用价值。

目前也发展了多种利用液体深层发酵发来产生灵芝多糖，如公开号为CN101235393A(发明名称：促进灵芝酸和灵芝多糖生物合成的发酵方法)，公开号为CN1141392C(发明名称：中间补料发酵生产灵芝多糖和灵芝酸的方法)，都极大的提高了发酵液中灵芝多糖的产量和含量，但如何从发酵液中提取灵芝多糖，并无相关论述。

发明内容

本发明的目的是提供了一种从发酵液中提取灵芝多糖的方法，具有产物提取效率高，多糖纯度高，不损伤多糖生物活性，节能，操作简单等显著的优点。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：一种灵芝细胞固定化方法，所述方法是先对灵芝多糖发酵液进行预处理，除去菌体和蛋白质；通过超滤除去部分小分子杂质；再通过预处理好的阳离子交换树脂和阴离子交换树脂，除去杂质，灵芝多糖流过离子交换树脂得到分离；流出液经冷冻干燥后，再真空干燥即可。

所述方法的第一个关键点是发酵液的预处理，先通过高速离心除去发酵液中的菌体和不溶性杂质，再通过酸碱选择性的变性，使蛋白质和部分杂质沉淀析出，高速离心除去蛋白质和杂质。上述处理除去了全部菌体和蛋白质，以及部分杂质，降低了发酵液的粘度，从根本上避免了超滤和离子交换时膜的堵塞 和树脂的污染，提高了整个工艺的收率。

所述方法的的第二个关键点是离子交换树脂的处理，选择适当的树脂，并保证料液的pH在一定的范围，就可以除去全部杂质，使大多数灵芝多糖经过离子交换得以分离。其工艺步骤为：

(1)除菌体和不溶杂质：常温下，以10000～14000r/min高速离心，收集上清液I；

(2)除去蛋白质：取上清液I，用酸调pH至2～4，升温至45～55℃，保持30～45min，搅拌下用8～15℃水冷却；常温下，以10000～14000r/min高速离心，收集上清液II，再用碱调pH至7.5～8.5，升温至45℃～55℃，维持45～55min，搅拌下用8～15℃水冷却；常温下，以10000～14000r/min高速离心，收集上清液III，用酸调pH至5.5-6.5，常温下，以10000～14000r/min高速离心，收集上清液IV；