[发明专利]一种猪氟烷基因基因型的检测方法

权利要求书

1.一种猪氟烷基因基因型的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

a)对猪氟烷基因进行PCR扩增，然后对扩增出的碱基片段进行碱基测序，确定猪氟烷基因的突变位点，根据突变位点两端的碱基序列设计两组引物，其中一组引物的上游引物3’端和野生型的基因位点匹配，另一组引物的上游引物3’端和突变型的基因位点匹配，两组的下游引物相同；

b)将待检测猪的样品DNA分别与野生型引物、突变型引物在两个反应体系中同时进行PCR扩增，扩增后每个样品与每组引物产生一个荧光信号，即每个样品产生两个荧光信号，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加，每经过一个循环，收集一次荧光信号，通过荧光信号的强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光信号强度曲线图，根据两个荧光信号的增强先后次序即可得出猪氟烷基因的基因型。

2.如权利要求1所述的一种猪氟烷基因基因型的检测方法，其特征在于：所述的野生型的基因位点的上游引物为5’CAA TGG TGT GGC CGT GT 3’，野生型基因位点的下游引物为5’GCC CAG ACC TGG TGA CAT A 3’，突变型基因位点的上游引物为5’CAA TGG TGT GGC CGT GC 3’，突变型基因位点的下游引物为5’GCC CAG ACC TGG TGA CAT A 3’。

3.如权利要求1所述的一种猪氟烷基因基因型的检测方法，其特征在于：在b步骤中，扩增体系为热启动Taq DNA聚合酶0.1U/ul、三磷酸脱氧核糖核苷酸0.2mM、上下游引物各0.2uM、样品DNA 50ng/ul以及SYBRGreen I染料、缓冲液，加ddH₂O至20ul；扩增反应条件为首先95℃变性15min，然后94℃变性15sec、50℃退火20sec、72℃复性20sec，共40个循环。

4.如权利要求1所述的一种猪氟烷基因基因型的检测方法，其特征在于：当野生型引物的荧光信号首先增强时，即可得出样品DNA为野生型。

5.如权利要求1所述的一种猪氟烷基因基因型的检测方法，其特征在于：当突变型引物的荧光信号首先增强时，即可得出样品DNA为突变型。

6.如权利要求1所述的一种猪氟烷基因基因型的检测方法，其特征在于：当野生型引物和突变型引物的荧光信号同时增强时，即可得出样品DNA为杂合型。