[发明专利]rhDSL重组蛋白及其制备方法

权利要求书

1、一种rhDSL重组蛋白，其特征在于为含有6×His组氨酸标签的Notch配体Delta-like-1的衍生多肽，所述衍生多肽由含有进化中的保守结构区DSL和与之相邻的N-端的50个氨基酸构成，共99个氨基酸，其氨基酸序列为：

LHTDSPDDLATENPERLISRLATQRHLTVGEEWSQDLHSSGRTDLKYSYRFVCDEHYYGEGCSVFCRPRDDAFGHFTCGERGEKVCNPGWKGPYCTEPI。

2、根据权利要求1所述的rhDSL重组蛋白，其特征是，所述rhDSL重组蛋白，以pQE30为表达载体构建表达质粒pQE30-hDSL。

3、根据权利要求1或2所述的rhDSL重组蛋白，其特征是，所述rhDSL重组蛋白，以大肠杆菌DH5α为载体进行重组蛋白的表达。

4、根据权利要求1或2所述的rhDSL重组蛋白，其特征是，所述rhDSL重组蛋白，在大肠杆菌中表达后以包涵体形式存在。

5、一种如权利要求1所述的rhDSL重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，构建rhDSL的重组表达质粒pQE30-hDSL；

第二步，以大肠杆菌DH5α为宿主表达rhDSL重组蛋白；

第三步，采用Q Sepharose阴离子交换层析与金属离子Ni²⁺亲和层析相结合的纯化方法进行rhDSL重组蛋白的纯化，得到rhDSL重组蛋白。

6、如权利要求5所述的rhDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述构建rhDSL的重组表达质粒pQE30-hDSL，是指：以重组质粒pGEX-2T/hDSL为模板，PCR的方法扩增hDSL基因片段，包括进化中的保守结构区DSL和与之相邻的N-端的50个氨基酸，共99个氨基酸，共298bp；割胶回收后的PCR目的产物和原核表达质粒pQE30经限制性内切酶HindIII、BamH I双酶切，连接割胶回收后的酶切产物，并将连接产物转化到预先制备的DH5α感受态细胞中，挑选阳性克隆，经测序证实无突变且读框正确。

7、如权利要求6所述的rhDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述原核表达质粒pQE30含6×His标签。

8、如权利要求5所述的rhDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述以大肠杆菌DH5α为宿主表达rhDSL重组蛋白，是指：挑取pQE30-hDSL质粒的DH5α的单菌落，25～30mL LB培养基37℃振荡培养过夜，次日将过夜菌液按2％的接种量转接到1L～2L的LB培养基内，转接后37℃培养2.5～3.0h左右，待OD600＝0.6～0.8的时候停止培养，加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L，诱导表达4h，收集菌体。

9、如权利要求8所述的rhDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述LB培养基含100μg/mL Amp。

10、如权利要求5所述的rhDSL重组蛋白的制备方法，其特征是，所述rhDSL重组蛋白的纯化，是指：收集的菌体经超声裂解和溶菌酶裂解细菌后，离心，收集沉淀包涵体，包涵体经8M尿素变性后，用稀释法缓慢复性，取复性后的上清液经Q Sepharose阴离子交换层析，得到初步纯化的rhDSL重组蛋白，将阴离子交换层析后所得蛋白溶液进一步通过金属离子Ni²⁺亲和层析并透析，得到rhDSL重组蛋白。