[发明专利]固体5’-磷酸二酯酶及其制备方法和应用有效
申请号: | 200810201058.7 | 申请日: | 2008-10-10 |
公开(公告)号: | CN101429502A | 公开(公告)日: | 2009-05-13 |
发明(设计)人: | 邱蔚然;曹静;谢胜;闫蓬勃;邱志云 | 申请(专利权)人: | 南通秋之友生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/22 | 分类号: | C12N9/22;C12P19/30 |
代理公司: | 上海金盛协力知识产权代理有限公司 | 代理人: | 罗大忱 |
地址: | 226236江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 固体 磷酸二酯酶 及其 制备 方法 应用 | ||
1.固体5’-磷酸二酯酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)液体酶浓缩液的提取;
(2)在步骤(1)提取的液体酶浓缩液中加入沉淀剂,收集糊状5’-磷酸二酯酶沉淀物;
所述沉淀剂选用硫酸铵或有机溶剂,所述有机溶剂为乙醇;
当沉淀剂选用硫酸铵时,其用量为在所述浓缩液达到40-80%饱和度;沉淀时,在浓缩液加入硫酸铵,达到40%饱和度,待其完全溶解后放置1-4小时,离心或过滤除去沉淀,然后再加入硫酸铵搅拌溶解,使硫酸铵的饱和度为80%,然后放置2-8小时,离心或过滤可得到糊状沉淀物;
当沉淀剂选用乙醇时,乙醇的重量用量为浓缩液的3~5倍;
(3)然后将沉淀物对重量浓度0~1%的甘油水溶液透析,将透析液干燥,即可获得5’-磷酸二酯酶粉末;
所述干燥为喷雾干燥,进风温度为120~140℃,出风温度为70~90℃,酶液预热温度为40-60℃。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将沉淀物在4~20℃对重量浓度0~1%的甘油水溶液透析10~48小时。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,液体酶浓缩液的提取方法如下:
将麦芽根与水或缓冲液混合,然后10~70℃浸泡1~24小时,过滤收集浸泡液,浸泡液在2500-3500转/分钟下离心分离,收集离心液,然后离心液超滤浓缩,使体积为原体积的1/2-1/3,获得浓缩液,为液体酶;
水或缓冲液的重量为麦芽根的8~12倍;
所述缓冲液的pH为4-10。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,麦芽根为啤酒工业废弃的麦芽根。
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