[发明专利]一种单克隆抗体的制备及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体的制备及其用途，具体说涉及一种适用于同时检测苏丹红I和对位红残留的单克隆抗体的制备及其用途，属于免疫化学分析技术领域。

背景技术

苏丹红(Sudan)为亲脂性偶氮化合物，是一种红色的工业合成染色剂，属于化工染料，主要用于石油、机油和其他的一些工业溶剂中，目的是使其增色，也用于鞋、地板、彩色蜡、焰火礼花等的增色增光。由于苏丹红化学结构中含有偶氮基团，人体摄入后，在还原酶的作用下体内会生成相应的胺类物质，从而对人体具有致癌性。

虽然我国以及绝大多数国家都早已明令禁止苏丹红作为添加剂用于食品中，但其能够使食物色泽更鲜亮持久，提高食品的价值，而被少数生产厂家违规当作了食用色素，苏丹红引起的食品安全问题在各大媒体报纸上也是时有报道。2004年6月14日，英国食品标准管理局就此前在超市一批新食品中发现含有潜在致癌物的苏丹红I号色素，向消费者和贸易机构发出了警示，禁用产品目录中的苏丹红I号。2005年2月，英国食品标准署下令将亨氏、联合利华等30家企业生产的可能含有苏丹红I号的400余种食品召回，引发了全球的“苏丹红”风暴。我国自2005年3月开始，也相继在辣椒调味品、鸡蛋、鸭蛋、番茄酱等食品中发现苏丹红(孙文汇等，苏丹红与食品安全，动物医学进展，2008，29(4)：103-105)。不仅是食品，2007年2月6日，国家质检总局对外发布了最新的唇膏、口红产品的质量专项抽查结报告，发现3种苏丹红首现国产唇膏的结果使得苏丹红的阴影蔓延到了化妆品领域。因此，苏丹红已经成为人类健康的一个潜在危险，对它的认识、研究和检测是非常必要，而且刻不容缓的(王继臣和杨继远，苏丹红的毒性及检测，商丘职业技术学院学报，2008，7(2)：97-99)。

目前，对苏丹红的检测方法主要是高效液相色谱分析法。将含有苏丹红成分的待测物经乙腈提取后，以波长可变的紫外可见光度检测器检测，可以定性定量地对食品中的苏丹红含量进行测定。2005年3月29日，国家质量监督检验检疫总局和国家标准委联合发布《食品中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法》(国家标准(GB/T 19681-2005))，用于我国的各食品用品中苏丹红的检测。另外，还有薄层色谱-紫外可见分光光度法(庞艳玲和王怀友，薄层色谱-紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红I号，分析实验室，2008，27(1)：60-62)。

色谱分析法确实能准确地定量分析出食品中的苏丹红残留，且灵敏度较高，但是其仪器成本高，实验样品处理步骤繁琐，费时费力，不利于大批量的样品检测。酶联免疫吸附分析法(ELISA)具有样品操作便捷、成本低廉、反应快速、灵敏度高、特异性强等特点，能更好地运用于苏丹红和对位红添加剂量的快速检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以单独或者同时定性和定量检测苏丹红I和对位红及其含量的单克隆抗体的制备方法。

本发明的另一目的在于提供该单克隆抗体在作为检测苏丹红I和对位红残留的用途。

本发明利用苏丹红I和对位红在结构上的部分相似性，采用苏丹红衍生物即羧基苏丹红作为半抗原与常规蛋白载体偶联得到相应的免疫抗原和包被抗原，制备出可以同时识别苏丹红I和对位红的单克隆抗体，并建立定性和定量检测苏丹红I和对位红及其含量的酶联免疫间接竞争测定法。

首先，本发明提供一种苏丹红衍生物与常规蛋白载体偶联得到的免疫抗原和包被抗原(即检测抗原)：

免疫抗原：由羧基苏丹红分别与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)反应，再与牛血清蛋白(BSA)偶联的复合物。

包被抗原(即检测抗原)：由羧基苏丹红分别与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)反应，再与卵清白蛋白(OVA)偶联的复合物。

蛋白载体除了与BSA、OVA偶联外，还可以与人血清的蛋白(HAS)和钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)等偶联。

本发明用到的一株杂交瘤细胞株SU-211-10，保藏在CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：C200813，是骨髓瘤细胞SP2/0与产生抗羧基苏丹红抗体的Balb/C小鼠B淋巴细胞融合后筛选获得的细胞株，所述的B淋巴细胞来自于上述羧基苏丹红-BSA免疫的Balb/C小鼠。