[发明专利]一种人巨细胞病毒(HCMV)荧光PCR检测方法

权利要求书

1.一种人巨细胞病毒(HCMV)荧光PCR检测方法，其特征在于包含两对特异性引物和两条特异性探针，扩增目标片段长度分别为91bp和160bp，序列为：

引物1：5`-ACCCTGTTCTTCCTCGCTAT-3`(Seq No.1)

引物2：5`-GCCCGAGCCCGACTTTA-3`(Seq No.2)

引物3：5`-CCAGTGAATTTCTCTTCCGTCT-3`(Seq No.3)

引物4：5`-CATAGAGATAGCGATAAATGAGTC-3`(Seq No.4)

探针1：5`-GATACAGCCGGCGGTATCGA-3`(Seq No.5)

探针2：5`-CTCCTTGATTCTATGCCGCACCAT-3`(Seq No.6)

或者与上述序列同源性大于75％的序列、或者上述所有序列的碱基互补序列。

其中，引物1、引物2与探针1组合，用于检测HCMV基因组UL122基因；

引物3、引物4与探针2组合，用于检测HCMV基因组UL123基因。

两条标记探针的荧光发光基团可以相同也可以不同，为FAM、TET、JOE、Cy3、Cy5、Cy5.5、Fluorescein、Rhodamine、Rhodamine Red、Rhodamine Green、Rhodamine 6G、Oregon Green 488、Oregon Green 500、Oregon Green 514、Texas Red、TAMRA、Inosine、HEX、FITC、Acridine orange、或ROX中的任意两种组合；荧光淬灭基团为DABCYL、DABSYL、TAMRA、BHQ-1、BHQ-2或BHQ-3中的任意一种或一种以上的组合。

2.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒(HCMV)荧光PCR检测方法，其特征在于采用多重荧光PCR检测技术，在一个反应管内对HCMV基因组的UL122和UL123基因同时进行检测，降低假阴性的发生率。

3.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒(HCMV)荧光PCR检测方法，其特征在于，PCR反应体系包括10mM Tris-HCl(PH 8.3)、50mM KCl、300μMd(AGC)TP、300μM dUTP、5mM MgCl₂、200nM各引物、200nM各探针、1U Taq酶、0.05U UNG酶。

4.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒(HCMV)荧光PCR检测方法，其特征在于，可以按如下程序进行实时荧光PCR检测：反应管先在50℃反应2分钟，然后95℃保温5分钟，再按94℃20秒→60℃45秒循环40次(60℃退火条件下采集相应探针标记通道的荧光)。