[发明专利]预示区分家养和野生双峰驼DNA微卫星的标记方法

权利要求书

1.一种预示区分家养和蒙古野生双峰驼DNA微卫星的标记方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)采集双峰驼耳部组织样品，根据常规酚/氯仿法提取基因组DNA；

(2)根据已有双峰驼微卫星标记设计16对PCR引物，具体如下：

CMS 9：F：TGCTTTAGACGACTTTTACTTTAC；

R：ATTTCACTTTCTTCATACTTGTGAT；

CMS 13：F：TAGCCTGACTCTATCCATTTCTC；

R：ATTATTTGGAATTCAACTGTAAGG；

CMS 16：F：ATTTTGCAATTTGTTCGTTCTTTC；

R：GGAGTTTATTTGCTTCCAACACTT；

CMS 18：F：GAACGACCCTTGAAGACGAA；

R：AGCAGCTGGTTTTAGGTCCA；

CMS 36：F：AAATTACTGAATTCCCCCCCTA；

R：GTTACAACGCTCTCATTCATC；

CMS 121：F：CAAGAGAACTGGTGAGGATTTTC；

R：AGTTGATAAAAATACAGCTGGAAAG；

vOLP 08：F：CCATTCACCCCATCTCTC；

R：TCGCCAGTGACCTTATTTAGA；

VOLP 10：F：CTTTCTCCTTTCCTCCCTACT；

R：CGTCCACTTCCTTCATTTC；

VOLP-67：F：TTAGAGGGTCTATCCAGTTTC；

R：TGGACCTAAAAGAGTGGAG；

LCA 65：F：TTTTTCCCCTGTGGTTGAAT；

R：AACTCAGCTGTTGTCAGGGG；

YWLL08：F：ATCAAGTTTGAGGTGCTTTCC；

R：CCATGGCATTGTGTTGAAGAC；

YWLL 36：F：AGTCTTGGTGTGGTGGTAGAA；

R：TGCCAGGTAACTGACAGTGAT；

YWLL 38：F：GGCCTAAATCCTACTAGAC；

R：CCTCTCACTCTTGTTCTCCTC；

YWLL 59：F：TGTGCAGGAGTTAGGTGTA；

R：CCATGTCTCTGAAGCTCTGGA；

CMS 17：F：TATAAAGGATCACTGCCTTC；

R：AAAATGAACCTCCATAAAGTTAG；

CMS 50：F：TTTATAGTCAGAGAGAGTGCTG；

R：TGTAGGGTTCATTGTAACA；

(3)利用设计的16对引物对双峰驼基因组DNA进行PCR扩增；

(4)使用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，根据PCR扩增产物的长度进行基因型分类；

(5)比较不同微卫星标记基因型在家养双峰驼和蒙古野生双峰驼的分布，定特异基因型；

(6)对特异等位基因扩增产物进行克隆和测序；

通过测序比较特异基因型和非特异基因型间DNA序列，在微卫星位点VOLP 10上家养双峰驼比蒙古野生双峰驼少13个CA重复序列；

通过测序比较特异基因型和非特异基因型间DNA序列，在微卫星位点YWLL36上家养双峰驼比蒙古野生双峰驼少2个GT重复序列；

通过测序比较特异基因型和非特异基因型间DNA序列，在微卫星位点YWLL38上家养双峰驼比蒙古野生双峰驼多5个GA和1个GT重复序列。