[发明专利]预示区分家养和野生双峰驼DNA微卫星的标记方法

说明书

技术领域

本发明是一种生物工程技术领域的标记方法，特别涉及一种预示区分家养和野生双峰驼DNA微卫星的标记方法。 

背景技术

微卫星称为简单序列重复(Simple Sequence Repeats，SSRs)或短串联重复(STRs)或短串联重复多态性(Short Tandem Repeat Polymorphism，STRP)或简单序列长度多态性(Simple Sequence Length Polymorphism，SSLP)等，是指以少数几个核苷酸为单位的多次串联重复DNA序列(多为1～6个核苷酸)，其长度一般为200bp左右(Beckmann等，《Gennomics》，1992，12卷，281—288页)。微卫星DNA串联重复分布于畜禽的整个基因组，重复次数为10～60次不等，其位点由微卫星及其两侧的侧翼序列构成。微卫星标记具有以下的特点；1、分布广泛、数量多。微卫星广泛分布于真核生物基因组中，例如猪基因组中存在着约65,000-100,000拷贝的二核苷酸重复单位AC/TG，平均每隔30-50kb就有一个。2、多态性较高。在不同的个体中，微卫星重复单位数目的变异非常大，由此而造成了高度的长度多态性，并使其具有较多的遗传信息。3、等位基因与基因型检测方法简便。4、共显性标记。微卫星标记遵循孟德尔遗传法则，呈共显性遗传，因此能很好地区分纯合子与杂合子；5、微卫星引物具有通用性。微卫星侧翼序列的保守性，使得从一个物种获得的引物可以应用于相关的分类群体。6、中性标记。在多数情况下，微卫星标记没有任何表型效应，因而不存在对研究对象个体的有害或次级效应，一般不会受到选择。正是微卫星具有上述优点，目前己被广泛应用于动物种群遗传学的研究中。 

骆驼属于哺乳动物偶蹄目(Artiodactyla)、胼足亚目(Tylopoda)、骆驼科(Camelidae)。骆驼分为2个属，即Camelus和Lama，Camelus有二个种，即单峰驼(Camelus Dromedaries，Dromedary camel，One-humped camel，也称阿拉伯驼)和双峰驼(Camelus Bactrianus，Bactrian camel，Two-humped camel)。 

目前世界上约有1800万峰骆驼，其中1600万峰单峰驼，200万峰双峰驼。单峰驼 主要分布于北非、东非、印度亚大陆及阿拉伯半岛的沙漠或干旱地区，而双峰驼大部分分布在亚洲及周边较为凉爽的地区，如中国、蒙古国、哈萨克斯坦、印度北部及俄罗斯。中国和蒙古国是世界上双峰骆驼主要产地，中国约有骆驼20.5万峰左右，主要分布在内蒙古、新疆、青海、甘肃、宁夏等省区约110万平方公里的干旱荒漠草原上。蒙古国有双峰驼38万峰，主要分布在南戈壁省、东戈壁省、中戈壁省、戈壁阿尔泰省、巴彦洪戈尔省、前抗爱省。双峰驼是一个古老物种，也是荒漠戈壁地区人民重要的生活和生产资料。由于自然和社会因素的变化和影响，目前家养双峰驼数量急剧下降，尤其是野生双峰驼濒于灭绝的境地。现存野生双峰驼是世界上仅存的真驼属野生种，它的同族兄弟是野单峰驼，早已在数百年前灭绝，由于人类活动的破坏干扰和自然环境的不断恶化，野骆驼数量急剧减少，现已被列入中国一类保护动物和世界濒危物种红皮书。据中外科学家们调查，20世纪80年代初全球约有2500-3000峰野骆驼，目前仅存1000峰左右，比大熊猫的数量还少，其中中国大约有700-800峰，其余200-300峰在蒙古国境内。 

关于双峰驼的研究更多地围绕其生态保护、解剖结构和产品特性方面，对其遗传基础和进化分类，特别是从分子遗传和分子进化方面的研究相对较少。目前对双峰驼进化问题，一种解释认为家养骆驼是从现存野骆驼进化而来，两者十分密切的遗传关系；一种解释认为现存野骆驼是分歧于家养骆驼，是家养骆驼管理不善跑到野外所形成。目前关于骆驼DNA微卫星研究较少，获得的骆驼微卫星数量也非常有限，因此开发和利用微卫星标记，对于解决开展双峰驼分子遗传和分子进化等研究工作是一项十分重要技术问题和迫切任务。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种预示区分家养和野生双峰驼DNA微卫星的标记方法。使得本发明操作简单，能从基因组分子水平上区分家养双峰驼和野生双峰驼，为双峰驼遗传和进化研究，特别是野生双峰驼的鉴定和保护，提供了重要的手段和方法。 

本发明是通过以下技术方案实现的：本发明包括以下步骤： 

(1)采集双峰驼耳部组织样品，根据常规酚/氯仿法提取基因组DNA。