[发明专利]一种利用单层培养技术制备和分离定型内胚层细胞的方法

权利要求书

1.一种制备含定型内胚层细胞的细胞群方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)培养容器中加入诱导分化培养基，所述的培养基包括：

Neurobasal培养基       400-570ml/L；

DMEM/F12培养基         400-570ml/L；

N-2添加物              3-7ml/L；

B-27添加物             5-15ml/L；

牛血清白蛋白           0.34-0.64mg/L；

单-二羟丙硫醇          0.09-0.225mM；

活化素A                10-50mg/L；

(2)将胚胎干细胞接种到(1)的培养基中，培养所述的胚胎干细胞3-10 天，诱导胚胎干细胞分化，从而获得含定型内胚层细胞的细胞群，所述细胞群 中定型内胚层细胞数量占细胞总数的40％以上；所述的胚胎干细胞为非人哺乳 动物的胚胎干细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前，还包括传代 培养胚胎干细胞的步骤：

(a)培养容器中加入传代培养基，所述的培养基包括：

Neurobasal培养基       400-570ml/L；

DMEM/F12培养基         400-570ml/L；

N-2添加物              3-7ml/L；

B-27添加物             5-15ml/L；

牛血清白蛋白           0.34-0.64mg/L；

单-二羟丙硫醇          0.09-0.225mM；

BMP4                   5-15mg/L；

白血病抑制因子         0.05-0.15ml/L；

(b)将原代胚胎干细胞接种到(a)的培养基中，传代培养所述的胚胎干细 胞，每2-5天传代一次，获得未分化的胚胎干细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述方法还包括：(3)从(2)获得的细胞群中分离出定型内胚层细胞群。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，分选细胞表面CXCR4分子阳 性且ECD分子阳性的细胞群，所述的细胞群是定型内胚层细胞群。