[发明专利]一种人细胞色素c的制备方法无效
| 申请号： | 200810202928.2 | 申请日： | 2008-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN101736005A | 公开（公告）日： | 2010-06-16 |
| 发明（设计）人： | 应天雷;谢琎;钟方芳;王中华;冯彦娇;黄仲贤;谭相石 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C07K14/80 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吴桂琴;包兆宜 |
| 地址： | 20043*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 色素 制备 方法 | ||
1.一种人细胞色素c的制备方法，包括人细胞色素c核苷酸编码序列与表达载体连接构建重组质粒，然后转化基因工程菌培养扩增并分离纯化，其特征是，基因工程菌扩增时接种于含2-4克/升的SB培养液。
2.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，所述表达载体是pBTR1或者pBTR2。
3.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，所述表达载体是pBTR-fd质粒。
4.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，所述基因工程菌是Rosetta(DE3)pLysS、Rosetta(DE3)或者BL21(DE3)pLysS。
5.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，基因工程菌扩增温度为35-40度，时间为18-28小时。
6.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，所述分离纯化过程是将扩增培养后的菌体依次经过超声破菌，离心，盐析，透析，过柱和脱盐过程。
7.根据权利要求6所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，所述过柱是上清液通过CM-52阳离子交换柱，再通过CM-琼脂糖高通量阳离子交换柱。
8.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，扩增培养时，培养液用塑料膜封口。
9.根据权利要求1所述的人细胞色素c的制备方法，其特征是，SB培养液含有8-15g/L蛋白胨、5-10g/L母提取物、3-6g/L NaCl、1-5mL/L甘油和1-10g/L NaNO3。
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