[发明专利]自身免疫性肝炎检测蛋白芯片及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白芯片疾病检测产品，具体地说，涉及一种自身免疫性肝炎检测蛋白芯片及其试剂盒。

背景技术

自身免疫性肝脏疾病主要包括原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)、自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、原发性硬化性胆管炎(primary scleroticcholangitis，PSC)，以及这三种疾病中任何两者之间的重叠综合征。虽然它们均属自身免疫性肝病，但病因、临床表现、及治疗各不相同，而早期诊断和早期治疗又是控制疾病进展的关键，故及时诊断及鉴别诊断成为临床治疗的首要措施。实验室检测特别是免疫指标的测定在临床诊断及鉴别诊断中有着重要的作用。

目前医院中对AIH的诊断方式普遍采用国际自身免疫性肝炎小组(IAIHG)制定的AIH记分系统。表1中为1999年修订版的AIH记分表，与1993年制定的评分系统相比新修订后的AIH评分系统更为科学。确诊或疑诊AIH的敏感性达89.8％。但也存在不足，尤其是其特异性较低，故有学者建议对那些评分已达AIH确诊或疑诊标准，但常规激素治疗无效者，需行胆管造影术以排除原发性胆管疾病。另外也有文献报道使用修订后的AIH评分系统难以诊断急性发作的AIH。AIH的评分系统仍需进一步完善。

表1自身免疫性肝炎国际评分系统(1999 IAIHG)

确诊：总积分治疗前＞15及治疗后＞17；疑诊治疗前10-15及治疗后12-17分.

AIH是一种原因不明的慢性进展性肝炎，发生于儿童和各年龄段的成年人，女性多见。目前普遍将AIH分为三种类型，I型主要以ANA(抗核抗体)，SMA(平滑肌抗体)、ANCA(抗嗜中性粒细胞胞浆抗体)、ASGP-R(抗去唾液酸糖蛋白受体)抗体阳性为特征：II型主要以LKM-1(肝肾微粒体1抗原)、LC-1(肝细胞溶质蛋白1)抗体为特征。AIH患者往往发病年龄小，治疗效果差。经过免疫抑制治疗，大多数I型AIH患者血清ANA和抗SMA可转阴，但抗体水平不能预示疾病的预后。这表明ANA和SMA均不参与AIH的发病机制，它们的诊断价值大于其预后价值。抗LKM-1抗体的靶抗原为细胞色素单氧化酶，是构成AIH患者识别线性抗原的决定簇，因与HCV病毒基因序列有部分同源性，所以约在7％慢性丙型肝炎患者血清中出现。III型为近年的发现，主要以anti-SLA(anti soluble liver antigen，抗可溶性肝抗原)为标志物。除此以外，还有抗可溶性肝、胰抗原(anti-LP)等蛋白也作为一些AIH特异性标志物被逐渐应用到诊断中。

随着对SMA研究的深入，人们发现作为SMA复合物组成部分的F-actin(纤维状肌动蛋白)在AIH病人中表现出很高的特异性。根据2006年的最新研究成果表明，F-actin阳性在AIH患者中的敏感度能够达到74％，而传统认为具有很高特异性的SMA在同样的患者群中只有34％的敏感度，同样F-actin与SMA的特异度则分别为98％和99％(Evaluation of F-actin ELISAfor the diagnosis of autoimmune hepatitis.Frenzel C，Herkel J，Lüth S，etc.Am JGastroenterol.2006 Dec；101(12)：2731-6)。

除F-actin外，SLA(可溶性肝抗原)也是目前人们发现的最新的AIH血清学标志之一。SLA抗体的阳性率虽然不高，但它对AIH特异性较高，可出现在LKM-1阴性的AIH患者血清中，而且在病毒性肝炎患者血清中呈阴性反应，不易造成误诊。

间接免疫荧光法(IIF)、酶免疫条带技术和Western Blot是当前进行AIH免疫学诊断的主要方法。这三种方法虽然技术上相对比较成熟，检测结果准确。但这些方法不是只能进行单指标检测，就是检测步骤繁琐，操作复杂而且耗费时间。并且这些方法目前用于产业化检测的领域仍然限于传统AIH免疫项目检测上，无法检测特异度和灵敏度更好的免疫指标(如SLA、F-actin)。

因此市场上迫切需要一种既能够快速而准确地提供免疫学检测结果，又能够将更新、更好的指标应用于产业化的检测产品。

发明内容

本发明要提供一种专门用于自身免疫性肝炎检测的多指标蛋白芯片及其试剂盒。解决目前市场上自身免疫学检测产品检测功能单一、检测指标滞后，并且没有集成化的缺点。