[发明专利]一种TNFR-Fc融合蛋白及其用途

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种新的重组TNFR-Fc融合蛋白及其用 途。

背景技术

人肿瘤坏死因子(hTNF-α)主要是由一种活化的单核/巨噬细胞产生的细 胞因子，这是一种具有多种生物学效应的细胞因子，早期研究发现TNF-α能诱 导肿瘤细胞坏死或凋亡，但后来发现TNF-α是介导炎症反应的主要细胞因子， 也是引起发热和败血症休克的重要因素，在心衰、移植排斥反应和自身免疫疾 病中起重要作用。适量的TNF-α能激活免疫系统、增强免疫力，在宿主抵抗微 生物入侵和抑制肿瘤产生的防御系统中起着关键作用。但过量的TNF-α表达 时，可以与其它炎性因子一起产生多种病理损伤。因此，TNF-α在体内起着双 刃剑的作用。

人们已在多种疾病的研究中证实了TNF-α的水平明显比正常人高，并发现 其可能的致病机理(Feldman M，et al.，Ann Rev Immunol 1996；14：397)。由于 TNF-α参与了多种疾病的发生和发展过程，在某些疾病中起关键作用，在某些 疾病中与其它因素共同作用；因此在不同水平上阻断TNF-α的作用，有可能对 与TNF-α有关的疾病产生治疗作用。目前以TNF-α为靶标的治疗疾病，有的已 经获准临床使用，获得了预期的效果，有的正在进行临床实验。

细胞表面存在两种不同的TNFR，即分子量分别为55KD的TNFRI (CD120α)和75KD的TNFRII(CD120β)。人TNF-α与TNFR的亲和力较高， 与TNFRI和TNFRII的亲和常数分别为1.23±0.23nM和0.36±0.13nM。两型 TNFR的膜外区均可脱落，仍然保留结合TNF-α的活性。将受体的膜外区与抗 体的Fc段连接，形成的融合蛋白则既可与TNF-α结合，又增加了稳定性，而 且通过Fc段可形成二聚体，比天然出现的单体受体对TNF-α有更大的亲和力。

现有技术中，美国Immunex公司开发出了商品化的TNFRII-IgG1/Fc融合 蛋白，称为Etanercept，商品名为Enbrel，已被FDA批准上市，用于治疗类风 湿性关节炎、强直性脊椎炎和抑制银屑病病人的骨和关节损伤。然而，包含 Enbrel在内的多种上市的TNF分子拮抗药物，由于这些药物具有诱导体内 ADCC和CDC作用的可能(Tracey D，et al.，Pharmacol Ther.2008； 117(2)：244-79)，因此这些药物都存在一定的副作用。

然而，目前发现的结合TNFα的制剂还存在结合能力较低，生物活性不高， 体内有效作用时间短的缺陷，因此本领域有必要进一步研究改进的药物，以有 效地提高药物疗效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种融合蛋白，所述的融合蛋白的氨基端是人肿瘤坏 死因子II型受体(TNFR II)可溶片段；羧基端是人IgG2的Fc片段。

本发明的另一目的在于提供所述的融合蛋白的用途及组合物。

在本发明的第一方面，提供一种融合蛋白，所述的融合蛋白的氨基端是人肿 瘤坏死因子II型受体(TNFR II)可溶片段；羧基端是人免疫球蛋白2(IgG2)的 Fc片段。

在另一优选例中，所述的融合蛋白在体内的半衰期高于48小时。

在另一优选例中，所述的人肿瘤坏死因子II型受体具有SEQ ID NO：1所 示的氨基酸序列。较佳的，所述的人II型TNFα受体可溶片段的氨基酸序列如 SEQ ID NO：1所示。

在另一优选例中，所述的人IgG2的Fc片段具有SEQ ID NO：2所示的氨 基酸序列。较佳的，所述的人IgG2的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：2 所示。

在本发明的第二方面，提供一种核酸分子，所述的核酸分子编码所述的融 合蛋白。

在另一优选例中，所述的核酸分子具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

在本发明的第三方面，提供一种载体，它含有所述的核酸分子。

在另一优选例中，所述的载体中还可操作性地连接有谷氨酰胺合成酶(GS) 的编码基因。

在另一优选例中，所述的谷氨酰胺合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：4 所示。

在另一优选例中，所述的谷氨酰胺合成酶的编码基因序列如SEQ ID NO：5 所示(或序列信息如Genebank X03495)。

在另一优选例中，所述的载体是pIRES双顺反子表达载体。