[发明专利]分子印迹聚合物的制备及用其分离盐酸克伦特罗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学工程技术领域的方法，具体是一种分子印迹聚合物的制备及用其分离盐酸克伦特罗的方法。

背景技术

盐酸克伦特罗(简称CLB)是一种人工合成的β₂-肾上腺受体激动剂，又称“瘦肉精”、“克喘素”等，临床一般用其盐酸盐。因其对β₂-受体选择性高，作用强，副作用较小，早期用于防治人、畜支气管哮喘和痉挛，是理想的平喘药，临床应用最为广泛。由于盐酸克伦特罗能实现动物营养再分配，改善胴体品质，导致瘦肉率增加。1984年，国外首次将盐酸克伦特罗作为饲料添加剂应用在羊、肉鸡和猪的生产中，并取得了较好的效果，从此盐酸克伦特罗作为一种饲料添加剂被大量应用。但长期食用含有“瘦肉精”的猪肉和内脏会引起人体心血管系统和神经系统的疾病。人误食盐酸克伦特罗，一般在食用后15min-6h出现症状，症状可持续90min-6天。近年来，国际上纷纷开展动物性食品中盐酸克伦特罗残留检测的研究，以建立起一个完整的动物性食品检测系统，保障人民的健康安全。我国于2003年制定了国标《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》(GB/T50091192-2003)，提出了动物性食品中盐酸克伦特罗残留监控方法，即：酶联免疫法(ELISA)筛选、高效液相色谱法(HPLC)定量到气质联机法(GC-MS)确证和定量。

目前国际上对动物组织中盐酸克伦特罗残留的监测方法主要分为色谱技术、免疫分析技术和生物传感技术及其它三大类。这些方法各有自身的优缺点，但是当用于从动物性食品中检测痕量存在的盐酸克伦特罗时，为减少复杂基质的干扰，一般都需要样品前处理。目前常用的前处理的方法有固相萃取、液液萃取、免疫柱层析技术等，与液液萃取相比，固相萃取技术操作简单，处理速度快，节约试剂，并可同时处理多个样品。但是，目前常用的固相萃取的填料与吸附目标物的作用缺乏选择性，易受复杂基质中类似物的干扰。而免疫柱层析虽然有特异性，但所用抗体价格昂贵，且稳定性不足，不能用于强酸、强碱和高温等极端环境。因此，研制新型的固相萃取填料，能够特异地识别样品中的盐酸克伦特罗，从而高效地选择性富集、纯化检测物，有很好的现实需要。

分子印迹技术是基于分子识别的新型聚合物的制备技术，在印迹中形成的特异性识别位点能和被分析物选择性作用，并且这种作用是可逆的。这种化学合成的材料机械强度和化学稳定性好，能在极端环境中使用。近年来，分子印迹技术应用于固相萃取，将分子印迹聚合物作为固相萃取填料，产生了一个具有广阔应用前途的领域，主要用于生物样品中物质的提取，特别是生物流体中样品的分析。目前，分子印迹技术在固相萃取技术方面的应用，尤其是在痕量物质的检测方面，模板残留问题已经严重阻碍了分子印迹聚合物在此领域的应用，采用模板类似物或进一步优化聚合物的后处理过程及高效去除模板分子的方法，是研究的重点。

经对现有技术的文献检索发现，Arndt Ellwanger等在《Analyst》(分析学家)(2001，126，784-792)上发表的“Evaluation of methods aimed at completeremoval of template from molecularly imprinted polymers”(对分子印迹聚合物去除模板残留方法的评估)中提出各种不同的分子印迹聚合物的模板去除前处理方法。经过微波萃取处理后得到最低的模板残留是3ng/mL。这样得到的分子印迹聚合物直接与酶联免疫吸附剂测定联用后检测灵敏度不高。

检索中还发现，Anders Blomgren等在《Journal of Chromatography A》(色谱A)(2002，975，157-164)上发表的“Extraction of clenbuterol from calfurine using a molecularly imprinted polymer followed by quantitation byhigh-performance liquid chromatography with UV detection”(分子印迹聚合物和HPLC-UV联用)中提出以盐酸克伦特罗的类似物溴布特罗作为模板用本体聚合的方法合成分子印迹聚合物。该法也存在模板残留问题，同时在酶联免疫吸附剂测定中会造成交叉感染问题。

发明内容