[发明专利]德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法

权利要求书

1、德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法，其特征在于德国镜鲤杂交优势种群按以下步骤进行筛选：a、形态标记：对各种群随机选出的德国镜鲤的可量性状和可数形状进行标记；b、再进行微卫星分子标记：(1)DNA的提取与纯化；(2)RCR扩增；(3)产物检测；(4)数据处理；c、数据分析，选择种群差异性大的作为德国镜鲤杂交优势种群。

2、根据权利要求1所述的德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法，其特征在于步骤a中可量性状包括体重、全长、体长、体高、头长、头高、尾柄长、尾柄高、吻长、眼径和眼间距。

3、根据权利要求1所述的德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法，其特征在于步骤a中可数形状包括左侧线上鳞、左侧线侧鳞、左侧线下鳞、右侧线上鳞、右侧线侧鳞和右侧线下鳞。

4、根据权利要求1所述的德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法，其特征在于步骤b(1)中采用酚/氯仿法提取鳍条基因组DNA，纯化后定量至DNA浓度为50ng/μL。

5、根据权利要求1或4所述的德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法，其特征在于步骤b(2)中RCR扩增反应体系为25μL：水14μL、10×PCR buffer 2.5μL、10mmol/L 4×dNTPs 2μL、2.0mmol/L MgCl₂ 1.5μL、10pmol/μL上下游引物各1μL、Taq DNA聚合酶1U和50ng/μL DNA模板1μL；RCR扩增引物为MFW1、MFW2、MFW3、MFW4、MFW5、MFW9、MFW7、MFW11、MFW14、MFW16、MFW19、MFW20MFW24、MFW29和MFW30；

引物MFW1中上游引物MFW1F的序列为：GTCCAGACTGTCATCAGGAG，下游引物MFW1R的序列为：GAGGTGTACACTGAGTCACGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、63.7退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW2中上游引物MFW2F的序列为：CACACCGGGCTACTGCAGAG，下游引物MFW2R的序列为：GTGCAGTGCAGGCAGTTTGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW3中上游引物MFW3F的序列为：GATCAGAAGGTACAGAGAAG，下游引物MFW3R的序列为：CCTTACAGAAAACCTGTTTGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、53℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW4中上游引物MFW4F的序列为：TCCAAGTCAGTTTAATCACCG，下游引物MFW4R的序列为：GGGAAGCGTTGACAACAAGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60.5℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW5中上游引物MFW5F的序列为：GAGATGCCTGGGGAAGTCAC，下游引物MFW5R的序列为：AAAGAGAGCGGGGTAAAGGAG，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、62.9退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW7中上游引物MFW7F的序列为：TACTTTGCTCAGGACGGATGC，下游引物MFW7R的序列为：ATCACCTGCACATGGCCACTC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、61.5退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW9中上游引物MFW9F的序列为：GATCTGCAAGCATATCTGTCG，下游引物MFW9R的序列为：ATCTGAACCTGCAGCTCCTC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW11中上游引物MFW11F的序列为：GCATTTGCCTTGATGGTTGTG，下游引物MFW11R的序列为：TCGTCTGGTTTAGAGTGCTGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、58.7退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW14中上游引物MFW14F的序列为：CAGAAGCTTCTGGAAATCTGAG，下游引物MFW14R的序列为：GCGAGAAGATTGATGGACAAC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60.1退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW16中上游引物MFW16F的序列为：GTCCATTGTGTCAAGATAGAG，下游引物MFW16R的序列为：TCTTCATTTCAGGCTGCAAAG，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60.1退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW19中上游引物MFW19F的序列为：CAATCCTCCATCATGCAAAC，下游引物MFW19R的序列为：GCACAAACTCCACATTGTGCC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、58.4℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW20中上游引物MFW20F的序列为：CAGTGAGACGATTACCTTGG，下游引物MFW20R的序列为：GTGAGCAGCCCACATTGAAC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、56℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW24中上游引物MFW24F的序列为：GCTCCAGATTGCACATTATAG，下游引物MFW24R的序列为：CTACACACACGCAGAGCCTTTC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60.1退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW29中上游引物MFW29F的序列为：CTACACACACGCAGAGCCTTTC，下游引物MFW29R的序列为：GAAGCTTTGCTCTAATCCACG，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、61.6退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW30中上游引物MFW30F的序列为：GGTCAACAAGTAGTTGTGCAG，下游引物MFW30R的序列为：CCATCTCTGTCATTGCAACAG，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、58.7退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min。