[发明专利]德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鲤鱼杂交优势种群的筛选方法。

背景技术

德国镜鲤(Cyprinus carpio L.mirror)是欧洲野鲤家养后因鳞被基因突变而分离出来的，再经人工培育形成的鲤鱼品种。1984年由联邦德国引入我国，并由中国水产科学研究院黑龙江水产研究所多年选育到F₄代，已经适应了我国的养殖条件，并继续表现其生长快的特性，已成为适合我国北方养殖的优良品种，被国家原种和良种审定委员会认定为国家级良种。但由于德国镜鲤选育系(F₄)是早在1995年选育完成的，且只选育到了第4代，所以某些遗传性状还不够稳定(如体形、鳞被和抗病力等)；加之20多年来德国镜鲤选育系(F₄)在全国各地养殖，已各自形成了独立的繁殖群体，其群体种质、遗传结构、生产性能等与F₄代相比可能有不同程度的改变；所以，现有不同德国镜鲤种群间的差异性难以衡量。

遗传多样性是每种生物所固有的特性，它是长期适应环境与进化的产物，遗传多样性越高则意味着适应生存能力越强，所蕴涵的育种和遗传改良能力也就越强，也就是说差别越大的群体间杂交所产生的杂种优势越大。选用种群差异性大的群体进行杂交可以减少工作量、缩短育种年限、降低育种成本和提高选育成功率；但是，如何从众多的德国镜鲤种群中筛选出杂交优势种群、确保其杂种的遗传多样性，目前尚没有行之有效的方法。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种行之有效的德国镜鲤杂交优势种群的筛选方法，以确保其杂种的遗传多样性，从而可以减少工作量、缩短育种年限、降低育种成本和提高选育成功率。

德国镜鲤杂交优势种群按以下步骤进行筛选：a、形态标记：对各种群随机选出的德国镜鲤的可量性状和可数形状进行标记；b、再进行微卫星分子标记：(1)DNA的提取与纯化；(2)RCR扩增；(3)产物检测；(4)数据处理；c、数据分析，选择种群差异性大的作为德国镜鲤杂交优势种群。

本发明步骤a中可量性状包括体重、全长、体长、体高、头长、头高、尾柄长、尾柄高、吻长、眼径和眼间距。步骤a中可数形状包括左侧线上鳞、左侧线侧鳞、左侧线下鳞、右侧线上鳞、右侧线侧鳞和右侧线下鳞。

本发明步骤b(2)中RCR扩增反应体系为25μL：水14μL、10×PCR buffer2.5μL、10mmol/L 4×dNTPs 2μL、2.0mmol/L MgCl₂ 1.5μL、10pmol/μL上下游引物各1μL、Taq DNA聚合酶1U和50ng/μL DNA模板1μL；RCR扩增引物为MFW1、MFW2、MFW3、MFW4、MFW5、MFW9、MFW7、MFW11、MFW14、MFW16、MFW19、MFW20MFW24、MFW29和MFW30；

引物MFW1中上游引物MFW1F的序列为：GTCCAGACTGTCATCAGGAG，下游引物MFW1R的序列为：GAGGTGTACACTGAGTCACGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、63.7退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW2中上游引物MFW2F的序列为：CACACCGGGCTACTGCAGAG，下游引物MFW2R的序列为：GTGCAGTGCAGGCAGTTTGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW3中上游引物MFW3F的序列为：GATCAGAAGGTACAGAGAAG，下游引物MFW3R的序列为：CCTTACAGAAAACCTGTTTGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、53℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW4中上游引物MFW4F的序列为：TCCAAGTCAGTTTAATCACCG，下游引物MFW4R的序列为：GGGAAGCGTTGACAACAAGC，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、60.5℃退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；

引物MFW5中上游引物MFW5F的序列为：GAGATGCCTGGGGAAGTCAC，下游引物MFW5R的序列为：AAAGAGAGCGGGGTAAAGGAG，PCR反应条件为95℃预变性5min，94℃变性30s、62.9退火30s、72℃延伸50s、30个循环，72℃延伸5min；