[发明专利]慢病毒三链体DNA、及含有慢病毒三链体DNA的载体和重组细胞

权利要求书

1.HIV-1表达载体，其包含：

a)分离的或纯化的核酸，包含至少一个拷贝的逆转录病毒cPPT和CTS顺式作用区域，其中该cPPT和CTS区域可诱导三链DNA结构，及

b)异源核酸序列，

其中所述HIV-1LTR的U3启动子和增强子被缺失。

2.权利要求1的载体，其是置换型载体，其中LTR之间的整个逆转录病毒或慢病毒编码序列被缺失。

3.权利要求1或2的载体，其中所述包含至少一个拷贝的cPPT和CTS区域的核酸是慢病毒的。

4.权利要求3的载体，其中所述包含至少一个拷贝的cPPT和CTS区域的核酸是人免疫缺陷病毒的。

5.权利要求4的载体，其中所述包含至少一个拷贝的cPPT和CTS区域的核酸是HIV-1或HIV-2的。

6.权利要求3的载体，其中所述包含至少一个拷贝的cPPT和CTS区域的核酸是VISNA、EIAV、FIV或CAEV的。

7.权利要求3的载体，含有单个拷贝的cPPT和CTS区域。

8.权利要求1的载体，其中所述异源核酸序列可操作地或物理地连接到所述包含至少一个拷贝的cPPT和CTS区域的核酸。

9.权利要求8的载体，其中所述异源核酸序列编码肽、多肽或蛋白质。

10.权利要求9的载体，其含有一个拷贝的cPPT-CTS顺式作用区域、在EF1α启动子控制下的GFP报告基因、和除去了其启动子和增强子的LTR的U3序列，且其是pTRIPΔU3EF1αGFP。

11.权利要求9的载体，其中所述异源核酸序列编码治疗性蛋白质。

12.含有权利要求1至11中任意一项的载体的重组细胞。

13.权利要求12的重组细胞，其中所述细胞是HeLa细胞或造血细胞。

14.权利要求12的重组细胞，其是造血干细胞。

15.体外增加异源核酸序列向靶细胞核输入的比率的方法，所述方法包括在允许摄取所述载体至所述靶细胞中的条件下暴露权利要求1至11中任意一项的HIV-1表达载体。

16.权利要求15的方法，其中所述异源核酸序列被输入到多于30％的宿主细胞。

17.权利要求16的方法，其中所述异源核酸序列被输入到多于50％的宿主细胞。

18.权利要求16的方法，其中所述异源核酸序列被输入到多于80％的宿主细胞的核内。

19.权利要求15或16的方法，其中所述异源核酸序列编码肽、多肽或蛋白质。

20.权利要求19的方法，其中所述蛋白质是治疗性蛋白质。

21.权利要求15的方法，其中所述靶细胞是分裂细胞或非分裂细胞。

22.权利要求15的方法，其中所述靶细胞是HeLa细胞或造血细胞。

23.权利要求15的方法，其中所述靶细胞是造血干细胞。

24.体外表达异源核酸序列的方法，所述方法包括：

a)在如下条件下将靶细胞暴露给权利要求1至11中任意一项的HIV-1表达载体，所述条件允许摄取所述含有异源核酸序列的HIV-1表达载体至靶细胞中，以产生重组细胞，及

b)在表达异源核酸序列的条件下培养所述重组细胞。

25.权利要求24的方法，其中所述异源核酸序列在组织培养中表达。

26.权利要求24或25的方法，还包括纯化或分离所述异源核酸序列的表达产物。

27.含有权利要求1至11中任意一项的HIV-1表达载体的重组细胞在生产使所述重组细胞能在个体体内表达异源核酸序列的治疗性化合物中的应用。

28.权利要求27的应用，其中所述细胞是造血干细胞。